DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)试剂盒

特别提示：包括DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)
英文名称：Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
产品规格：1ml

本品是一种经过我们多次实验证实、可以用于DNA oligo退火的缓冲液。该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA oligo的退火，而且特别适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。用于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列，极易自身形成发夹结构，从而影响两条DNA oligo的正确退火。使用百奥莱博的Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)，可以有效避免DNA oligo自身形成发夹结构，并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。

使用本品操作非常简单，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)按照一定比例混合后，置于PCR仪上，约90分钟即可完成。如果一次退火反应体积为100微升，一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。

使用说明：

1. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的MiliQ水或重蒸水配制成50μM。溶解Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)，混匀备用。

2. 如下设置退火反应体系：
Nuclease-Free Water——>40µl
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)——>20µl
DNA oligo A (50µM)——>20µl
DNA oligo B (50µM)——>20µl
按照上述顺序依次加入各种试剂，混匀。如果所用的PCR仪没有热盖，滴加矿物油(mineral oil)以防止蒸发。

3. 如下设置PCR仪进行退火反应：

步骤	温度	时间	说明
1	95℃	2分钟	让oligo充分变性
2	每8秒下降0.1℃，降至25℃(注1)	约90分钟	退火
3	4℃	长时间保持	暂时存放

注1：如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能，也可以设置为每90秒下降1℃。

4. 退火结束后可以直接用于连接反应，也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应，最好用纯化试剂盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%，以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。

储存条件：-20℃，有效期一年。