Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅠ ELISA Kit储存及有效期: 1、未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶
液A、检测溶液B 以及96 孔板保存于-20oC。
2、使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于
-20oC,避免潮湿。
注意: 试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1 个月内使用完毕。
产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。
Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅠ ELISA Kit标本的采集与保存: 1、血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2 小时或4oC 过夜,然后1000×g 离心20 分钟,取上清即
可,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。
2、血浆:用EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30 分钟内于2-8oC 1000×g 离心15 分钟,
取上清即可检测,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。
3、组织匀浆:
1) 取适量组织块,于预冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,称重后备用(组织块较大需先剪碎后
再匀浆);
2) 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果:首先将组织块移入玻璃匀浆器,加入5-10mL 预冷PBS 进行充
分研磨,该过程需在冰上进行(有条件实验室可选用机器匀浆);得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融
进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温;反复冻融法可重复2 次)。
3) 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟,留取上清即可检测。
4、细胞裂解液:
1)贴壁细胞需要先用胰酶消化,离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集);
2)将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次;
3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞,再反复冻融):
i 超声破碎:取适量PBS 重悬细胞,用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂。
ii 反复冻融:将待破碎的细胞在-20oC 以下冰冻,室温融解,反复3 次,使细胞溶胀破碎。
4)将标本于2-8oC 1500×g 离心10 分钟,收集上清备用。
5、细胞培养上清或其它生物标本:请1000×g 离心20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC 或-80oC 保
存,但应避免反复冻融。
注意:
1、以上标本均需密封保存,4oC 保存应小于1 周,-20oC 不应超过1 个月,-80oC 不应超过2 个月。
2、标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
3、标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。
Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅠ ELISA Kit操作步骤:
1.Add 100 μL of standard or sample to each well.
2.Remove the liquid.
3.Add 100 μL Biotinylated Detection Ab. Incubate 1 hour at 37℃.Aspirate and wash 3 times.
4.Add 100 μL HRP Conjugate. Incubate 30 min at 37℃.Aspirate and wash 5 times.
5.Add 90 μL of Substrate Reagent. Incubate for 15 min at 37℃.
6.Add 50 μL of Stop Solution.
7.Read the OD at 450 nm immediately. Calculation of the results.