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- 2025年12月12日
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色谱条件
色谱柱：TSKgel G4000SWXL (7.8 mm×30 cm) 色谱柱 (TOSOH)、TSKgel guard column SWXL(6.0mm×4cm)保护柱(TOSOH)；流动相：pH7.2的 50 mmol/L 磷酸缓冲液，含 0.1 mol/L Na2SO4； 紫外检测器检测波长：259 nm；流速：0.6 mL/min。将 146S 纯化样品色谱检测结果作图，经线性回归处理，得到146S的回归方程为：Y=45216X–78 422 (R2=0.996， n=10)，结果表明， 146S 在0.56–67.42 µg/mL 范围内呈良好的线性关系，当浓度为 0.56 µg/mL 时，S/N=14.62，满足定量限要求。146S 抗原保留时间在 13–14 min 。
耐受性实验
通过改变流动相pH值和环境温度，考察方法耐受性。TSKgel G4000SWxl色谱柱pH适用范围在2.5-7.5，且应置于4-30°C。维持146S抗原稳定性的最适pH值为7.8。调节流动相pH范围在6.9-7.5之间。146S抗原色谱峰保留时间和峰形一致，考虑到色谱柱耐受性，选用该流动相未经过调节的pH值7.2-7.4。为防止146S降解，需注意实验室温度不应过高，且仪器样品盘英设定低温进样。
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文献和实验溶剂，如乙腈、丙酮、甲醇或乙醇等。TSK-GEL SW系列色谱柱适合用于分析分离蛋白质和多肽类样品，其他应用有大量文献报道。最经常使用的是10μm的TSK gel G2000SW，TSK gel G3000SW和13μm的TSK gel 4000SW色谱柱；TSK-Gel 2000SWXL和3000SWXL是5μm，TSK-Gel 4000 SWXL是8μm的高效填料色谱柱；分析型色谱柱的结构可以是玻璃或不锈钢材质。TSK-GEL SW系列部分色谱柱填料的种类及特性 品牌 粒度（μm）孔径（Å） 样品
亲水性乙烯基树脂基质蛋白分离用色谱柱，除了可选用键合了离子交换基团的离子交换柱外，还可选用疏水反应、亲和等其他多种类型的柱子。 这些类型的色谱柱，其充填介质化学稳定性好，不易发生由于官能基脱落而导致样品组分洗脱位置变化的现象。尽管如此，由于柱子的反复使用，在长时间使用后，样品组分的洗脱情况还是会发生改变的。其原因与样品中极微量的附吸物在柱中的蓄积有关。特别由于生物样品组分复杂，这种吸附现象时有发生。（非特异性吸附）当观察到这样的现象后，应使用合适的溶剂将蓄积
能尺寸排阻色谱所必需的性能，即低吸附性和良好的孔径分布；其pH适用范围为2.5-7.5，可以使用与水完全互溶的有机溶剂，如乙腈、丙酮、甲醇或乙醇等。TSK-GEL SW系列色谱柱适合用于分析分离蛋白质和多肽类样品，其他应用有大量的文献报道。最经常使用的是10μm的TSKgel 4000SW色谱柱；TSK-Gel2000SWXL和3000SWXL是5μm，TSK-Gel 4000SWXL是8μm的高效填料色谱柱；分析型色谱柱的结构可以是玻璃或不锈钢材质。
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