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- 2025年11月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 英文名：
QIAGEN Large-Construct Kit
- 保质期：
已收到实际货物为准
- 供应商：
北京诺博莱德科技有限公司
- 保存条件：
已收到实际货物为准
纯化至多50 μg BAC、PAC和P1 DNA或至多200 μg的柯斯质粒DNA和非基因组DNA
- 高效去除基因组DNA污染
- 转染级别纯度的高分子量DNA
- 快速简单的操作
QIAGEN Large-Construct Kit提供重力流和阴离子交换柱，用于纯化大分子量的DNA。独特的ATP-dependent外切酶消化步骤，确保特异性去除基因组DNA。产物DNA的纯度相当于经过两次CsCl密度梯度离心得到的纯度，适用于转染级别的应用。
使用QIAGEN Large-Construct Kit纯化DNA，无基因组DNA的污染（参见"Efficient removal of genomic DNA"）。基因组DNA的去除确保准确可靠的进行DNA定量，使一些敏感实验可在明确的和可重复的条件下进行。
Principle
QIAGEN Large-Construct Kit使用经优化的重力流操作，获得的DNA的纯度显著高于其他常规方法获得的DNA的纯度。独特的ATP-dependent外切酶消化步骤，确保特异性去除基因组DNA。
QIAGEN Large-Construct Kit含有的QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂专为核酸纯化设计。其出色的核酸分离特性可纯化得到高纯度DNA，相当于经过两次氯化铯梯度离心得到的纯度。预装的QIAGEN-tips（参见"Anion-exchange tips"）运用重力沉降原理，减少了质粒制备过程所需的手工操作时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用苯酚、氯仿、溴乙锭和氯化铯等有毒物质，最大程度减小了对使用者及环境的危害。
Procedure
使用碱裂解法裂解多达500 ml的培养液后（参见"QIAGEN Plasmid Kit procedures"），使用试剂盒中的ATP-dependent外切酶进行消化，确保特异性去除基因组DNA及缺损的高分子量DNA。之后将样本上样至阴离子交换柱，在适当的低盐浓度和pH值条件下，质粒DNA与树脂特异性结合。用中等盐浓度的缓冲液洗涤，去除RNA、蛋白质、代谢物和其他小分子的杂质。用高盐缓冲液洗脱已去除基因组DNA的纯化质粒DNA。加入异丙醇使DNA浓缩和脱盐，之后离心收集。
Applications
QIAGEN Large-Construct Kit纯化获得的DNA适用于各种下游应用，包括：
- 亚克隆和鸟枪法制备DNA文库
- 对高分子量DNA直接进行测序
- 转染
Features Specifications 应用 Subcloning, transfection, sequencing etc. 起始样本体积 <500 ml culture volume 质粒类型 BAC, PAC, P1, cosmid DNA 处理 Manual (centrifugation) 每次处理样本量；通量 1 sample per run 技术 Anion-exchange technology 每次运行时间或处理样本数 280 min 产量 <150 ug 相关产品 商品编号 商品品名 规格 品牌 53706 超敏病毒DNA/RNA提取试剂盒 250T Qiagen 53704 超敏病毒DNA/RNA提取试剂盒 50T Qiagen 12462 纯化大片段DNA BAC，PAC 10T Qiagen 206143 多重PCR试剂盒 100T Qiagen 206145 多重PCR试剂盒 1000T Qiagen 12191 巨量质粒提取试剂盒 5T Qiagen 12162 大量质粒提取试剂盒 10T Qiagen 12165 大量质粒提取试剂盒 100T Qiagen 12163 大量质粒提取试剂盒 25T Qiagen 12183 超大量质粒提取试剂盒（10mg） 25T Qiagen 12181 超大量质粒提取试剂盒（10mg） 5T Qiagen 12145 中量质粒提取试剂盒 100T Qiagen 12143 中量质粒提取试剂盒 25T Qiagen 12965 超速纯化大量质粒提取试剂盒 100T Qiagen 12963 超速纯化大量质粒提取试剂盒 25T Qiagen 27106X4 超纯质粒提取试剂盒 1000T Qiagen 27106 超纯质粒提取试剂盒 250T Qiagen 27104 超纯质粒提取试剂盒 50T Qiagen 28706X4 胶回收试剂盒 1000T Qiagen 28706 胶回收试剂盒 250T Qiagen 28704 胶回收试剂盒 50T Qiagen
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文献和实验Materials For purifying plasmid DNA from Escherichia coli cells, the Qiagen Spin Miniprep Kit produces quite reliable results. Do not autoclave solutions containing isopropanol or MOPS; use sterile filtration if necessary.
QIAGEN Plasmid plus Kit——超快纯化多至10 mg转染级别纯质粒
♦利用真空方式超快速进行质粒纯化，碱裂解步骤后，利用QIAfilter无须离心即可澄清裂解液，然后离心柱安置于真空底座（例如：QIAvac 24 Plus 见图1）上进行DNA的洗涤和洗脱。Midi and Maxi kit 20 分钟内可纯化24 个样本Mega和Giga Kit可分别在40，50分钟内处理12个样本。 ♦QIAGEN Plasmid plus Midi/Maxi Kit 提供优化的高产量protocol 并采取高洗脱体积，确保纯化得到高产量质粒DNA
Large Scale Plasmid Preps: Qiagen/Cesium Method
most of it will pellet along with the bacterial cell wall. However the relative purity of the plasmid DNA will drop if the plasmid is large or at a relatively low copy number in the prep. The combination of a kit prep with cesium banding eliminates this problem
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