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Qiagen 73504 RN
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RNeasy FFPE Kit
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北京诺博莱德科技有限公司
Qiagen 73504 RNeasy FFPE Kit 组织包埋块提取总RNA试剂盒从福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中纯化总RNA
RNeasy FFPE Kit专为从福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中纯化总RNA而设计。独特的裂解和孵育条件逆转福尔马林对RNA的修饰。并且裂解缓冲液可将RNA从组织切片中有效释放出来,防止RNA的进一步降解。试剂盒同样使用DNase和DNase Booster Buffer优化,去除基因组DNA的污染。使用RNeasy MinElute离心柱纯化获得的总RNA,洗脱体积可小至10 μl。整个纯化流程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。Qiagen 73504 RNeasy FFPE Kit 组织包埋块提取总RNA试剂盒
用福尔马林固定组织会导致RNA-RNA和RNA-蛋白质的交联,这会影响RNA在酶学分析中的性能。FFPE样本固定和包埋同样会导致核酸的严重片段化。RNeasy FFPE Kit提供了独特的裂解和孵育条件来逆转福尔马林对RNA的修饰。裂解缓冲液能使RNA从FFPE组织样本中有效释放,并防止进一步的RNA降解。经优化的条件能纯化得到所有可用的RNA,使用RNeasy FFPE Kit从FFPE样本中得到的RNA的产量比其他方法更高。
整个RNeasy FFPE操作流程可在85分钟内完成(参见"RNeasy FFPE procedure")。使用蛋白酶K裂解样本仅需15分钟。裂解后,样本在80ºC下孵育15分钟。之后,用DNase处理能有效去除样本中的基因组DNA,包括小的DNA片段。最后,使用RNeasy MinElute离心柱即可收集纯化的RNA,洗脱体积14–30 µl。纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。
RNeasy FFPE Kit可纯化FFPE 样本中所有大于70 nt RNA,得到适用于RT-PCR等众多下游应用的RNA片段。但是,从FFPE样本中纯化得到的RNA会严重片段化,不能用于需要完整RNA的下游应用。如果使用片段化RNA可能需要做些修饰(例如在RT-PCR时设计小的扩增子)。进行cDNA合成时,不能使用oligo-dT引物,而要使用随机或基因特异性引物。
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