卡尔费休含吡啶

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验准备
在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，最好-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。
液体类标本:  包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
1. 血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
3. 尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
5. 培养细胞
    检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6. 组织标本
    切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。                                     笃玛代测服务：
技术服务内容： 1、双抗体夹心法检测抗原 2、间接法检测抗体 3、为客户提供各种ELISA技术进行样本检测。
寄标本时需注明以下情况：1、标本编号；2、所测项目；3、是否做复孔；4、联系方式；5、实验后标本是否寄回。

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实验步骤：
1.包被抗原：稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液，多肽浓度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC过夜，洗净。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭，0.1ml/孔，37oC1h，洗净。
3.稀释抗血清(可稀释不同浓度) 0.1ml/孔，37oC 30分钟，洗净。
4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔，37oC 40分钟，洗净。
5.显色：TMB显色
A液：四甲基联苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.
B液：5ul双氧水加蒸馏水12.5ml 。
终止液：2N硫酸
A液、B液各一滴，比光显色10分钟，终止液一滴。
6.450nm 波长测OD值

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样品收集、处理及保存方法
1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。