染色例:
BCECF-AM是一种对细胞内pH敏感的新型荧光探针,分别用490 nm和440 nm波长激发BCECF所得到的发射荧光之比与pH有很好的线性关系。
BCECF-AM是乙酰甲酯化的BCECF,BCECF-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料,BCECF-AM没有荧光,进入细胞后被细胞内的酯酶水解成BCECF,从而被留在细胞内。BCECF在适当的pH值情况下可以被激发形成绿色荧光。
BCECF-AM不仅被广fan用于哺乳动物细胞的研究,也有报道用于动物组织、植物细胞、细j和酵母等的细胞内pH水平检测。在有细胞内pH变化的细胞*性、细胞凋*、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中BCECF AM被广fan应用。
BCECF-AM (pH荧光探针)需用无水DMSO(anhydrous DMSO)配制
操作说明 (for Human Neutrophil)*
试剂(溶解方法):
1 mM 的BCECF-AM / DMSO溶液 (将1 mg 的BCECF-AM溶于 1.45 ml DMSO)
HEPES缓冲液(20 mM HEPES,153 mM NaCl,5 mM KCl,5 mM glucose,pH 7.4)
操作:
1. 用HEPES制备细胞悬液,细胞浓度为4×107个/ml。
2. 将1 mM的BCECF-AM / DMSO溶液加入细胞悬液中(细胞悬液的1/300体积),BCECF-AM终浓度
为3 μM。
3. 37℃培养30分钟。
4. 用HEPES缓冲液清洗细胞3次,制成3×106个/ml的细胞悬液。
5. 使用荧光显微镜或带有图像分析系统的激光共聚焦显微镜检测细胞的荧光强度。
*标记的条件因细胞种类而异,在每次实验前,请先确定zui佳条件。以上方法仅供参考。
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Cell staining with BCECF-AM
Cell type: HeLa