胰蛋白酶，T2600000

肿瘤成球实验以及肿瘤球体增殖/活力检测方案

方法。 收获细胞（保证健康的单细胞悬液）。 使用胰蛋白酶-EDTA 溶液 ( T3924 ) 分离上述贴壁细胞。Millicell® Digital Cell Imager（MDCI10000）观察到细胞融合度应为80-90%，且状态良好。 以300 x g离心细胞悬液 5分钟并吸出上清液。将细胞重悬于少量培养物中，例如 3-5 mL 的 3dGRO™ 球状体培养基 ( S3077 ) 注：可让细胞穿过40 µM细胞过滤器或带细胞过滤器卡扣盖的5 mL 圆底聚苯乙烯试管，以实现单细胞悬浮。

做了 5 年 MTT 实验，跟你分享几点心得体会

。4. 比色：选择 490 nm 波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。个人心得体会1. 细胞消化、接种数量：注意消化和数量，消化和数量，消化和数量（重要的事情说三遍）。从我个人的实验经验来看，这是重中之重。若消化出现问题，则会影响细胞的活性，进而影响 OD 值。对于 MDA-MB-231、MCF-7、HS-578T 等一系列容易消化的细胞，消化时胰蛋白酶中不添加 EDTA，消化时也仅需胰酶浸润数秒即可。然而，对于 SW480 等一系列难以消化的细胞，胰蛋白酶中需添加浓度为 0.25

肥大细胞产生的介质--预先合成的介质

细胞中，当系统性过敏反应发生时，随肥大细胞脱颗粒释放人血α类胰蛋白酶在肥大细胞中的特异性可作为肥大细胞不同亚型及肥大细胞与其他细胞相区别的标志。       人类肥大细胞至少分为两种，T(类胰蛋白酶)肥大细胞和TC(类胰蛋白酶／类糜蛋白酶)肥大细胞。T肥大细胞多存在于肺(尤其是肺叶)及肠黏膜，每个T肥大细胞含类胰蛋白酶lopg，TC肥大细胞多存在于皮肤及肠黏膜下层，每个TC肥大细胞含类胰蛋白酶35pg，类糜蛋白酶4．5pg。类胰蛋白酶的功能尚不十分明确，在过敏性反应或哮喘患者的肺泡液中可检测