丁酸钠

外源基因在真核细胞表达技术

至1 ml。室温下将以上2×钙-DNA溶液与等体积的2×HEPES盐溶液混合。迅速弹敲试管侧壁混匀溶液，静置1 min。（3）立即将磷酸钙-DNA悬液转移至上述单层细胞的细胞培养基中。每1 ml培养基加0.1 ml悬液。轻轻摇动平皿混匀培养基，培养基会变成混浊的橘黄色。一旦形成DNA沉淀，转染效率会大大降低，因此此步动作应尽可能迅速。如果是用氯喹、甘油与/或丁酸钠处理细胞，直接进行步骤5。（4）如果转染的细胞不用转染促进剂处理，则置于含5%~7%CO2的37℃温箱孵育。2～6 h后，吸去培养基与DNA

腺相关病毒（AAV）技术快速入门

，并且对氯仿等试剂具有抗性。 特异性强：rAAV 有十数种常用的血清型，不同的血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力。   rAAV 的局限性有哪些？ 体外实验表达水平较低：主要是因为 rAAV 病毒的基因组是单链 DNA，在体外环境形成双链并转录翻译外源基因的效率非常低。可以在体外水平感染 rAAV 病毒的同时感染辅助病毒比如 Ad 5 型腺病毒或者终浓度 10~50 mM 的丁酸钠等方法提高细胞实验的 rAAV 表达量。 需较长时间开始表达：同样是需要从单链 DNA 变成双链 DNA，rAAV

VSVG假型逆转录病毒的生产

7×106细胞）2. 第2天： （1）准备Ca-P（calcium-phosphate）转染液。（2）加入2×HeBS（pH7.0）450 μl 到Ca-P转染液中并持续涡旋混匀。（3）用包含最终浓度25 μm 氯喹的新鲜的DMEM培养基更换细胞培养液。（4）逐步对细胞撒上900 μl 逆转录病毒载体混合物，并于37°C，孵育细胞。（5）3-4 h 后，用新鲜的DMEM培养基更换细胞培养液，添加终浓度为10 μm 的丁酸钠，并于37°C，孵育细胞。注意：必须在12-14 h 后移