碱性磷酸酶标记山羊抗兔IgG(H+L)厂家价格

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名称：碱性磷酸酶标记山羊抗兔IgG(H+L)厂家价格
编号：ZN1981
规格：100μl
英文名：Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)Secondary Antibody,AP Conjugate
品牌：百奥莱博
产地：北京
Western Blotting:1:3000-10000(Enhanced chemilμminescent detection)
Western Blotting:1:500-3000(DAB detection)
Direct ELISA:1:5000-30000(TMB detection)
Optimal working dilutions must be determined by end users.
保存：4℃ for one year

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K15772 FAM76B蛋白抗体 Rabbit Anti-FAM76B antibody
K19124 离子通道蛋白Kv1.3抗体 Rabbit Anti-KCNA3 antibody
K10023 脂肪组织分化相关蛋白抗体 Rabbit Anti-ADFP antibody
K27000 液泡蛋白分选蛋白41抗体 Rabbit Anti-VPS41 antibody
Q01981 Transferrin Receptor/TFRC/CD71抗体 Anti-Transferrin Receptor Antibody(Mouse Monoclonal antibody)
K21251 线粒体苹果酸脱*酶2抗体 Rabbit Anti-MDH2 antibody
K12149 碳酸酐酶相关蛋白8抗体 Rabbit Anti-CA8 antibody
Q00754 TRAIL R1/CD261/TNFRSF10A抗体 Anti-DR4 Antibody(Rabbit Polyclonal antibody)
Q04107 PerCP标记CD25/IL2RA抗体 Anti-CD25 Antibody(PerCP)(Rabbit Monoclonal antibody)
K23377 丝*酸/苏*酸激酶蛋白PIM1+PIM3抗体 Rabbit Anti-PIM1+PIM3 antibody
K14275 DYDC1蛋白抗体 Rabbit Anti-DYDC1 antibody
Q02880 Ephrin-A1/EFNA1抗体 Anti-Ephrin-A1 Antibody(Mouse Monoclonal antibody)
Q06233 IFNL3/IL28B/Interleukin-28B抗体 Anti-IL28B Antibody(Rabbit Monoclonal antibody)
K25503 小泛素样修饰蛋白4抗体 Rabbit Anti-SUMO4 antibody
K16400 磷酸化葡萄糖合成酶1抗体 Rabbit Anti-Phospho-Glycogen synthase 1(Ser641) antibody
K19753 肝脏X受体抗体 Rabbit Anti-LXR alpha antibody
K10652 卡尔曼综合症基因1抗体 Rabbit Anti-KAL1 antibody
K27629 锌指蛋白264抗体 Rabbit Anti-ZNF264 antibody
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·ghrelin mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN0587
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液2ml；
3.ghrelin mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml；
4.封闭液5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxin5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxin：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
ghrelin的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。


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K26132 四分子交联体15抗体（四旋蛋白） Rabbit Anti-TSPAN15 antibody
K17029 G蛋白偶联受体TAS1R1蛋白抗体 Rabbit Anti-GPR70 antibody
Q05635 IL19/Interleukin-19抗体 Anti-IL-19 Antibody(Rabbit Polyclonal antibody)
K11280 巴尔得-别德尔综合征相关蛋白7抗体 Rabbit Anti-BBS7 antibody
K28258 SET结合蛋白1抗体 Rabbit Anti-SETBP1 antibody
K19155 KLRA1蛋白抗体 Rabbit Anti-KLRA1 antibody
K10054 活化复制因子2抗体 Rabbit Anti-ATF2 antibody
K13406 C型凝集素结构域家族9成员A抗体 Rabbit Anti-CLEC9A antibody
Q02012 CUEDC2抗体 Anti-CUEDC2 Antibody(Rabbit Polyclonal antibody)
K21282 核小体组装蛋白1抗体 Rabbit Anti-NAP1L1 antibody
K24635 视网膜前神经折叠同源框蛋白抗体 Rabbit Anti-RAXL1 antibody
K15532 磷酸化叉头蛋白3A抗体 Rabbit Anti-Phospho-FoxO3a (Ser253) antibody
Q04137 CD155/PVR抗体 Anti-CD155/PVR Antibody(Rabbit Monoclonal antibody)
K23408 磷酸化磷脂酰肌醇激酶调节亚单位gamma抗体 Rabbit Anti-phospho-PI3-kinase regulatory subunit gamma (Tyr199) antibody
K26761 尿嘧啶核苷磷酸化酶1抗体 Rabbit Anti-Uridine Phosphorylase 1 antibody
K17658 结合珠蛋白相关蛋白抗体 Rabbit Anti-HPR antibody
Q06263 gastric lipase/LIPF抗体 Anti-LIPF Antibody(Rabbit Polyclonal antibody)
K25534 2型猪链球菌溶血素抗体 Mouse Anti-Streptococcus suis Suilysin antibody
Q00514 CD25/IL2RA抗体 Anti-CD25 Antibody(Mouse Monoclonal antibody)
K19784 核纤层蛋白相关蛋白1B抗体 Rabbit Anti-LAP1B antibody
K10682 腺相关病毒5抗体 Rabbit Anti-AAV5 capsid VP2 protein antibody
K14035 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗体 Rabbit Anti-Caspase-12 antibody

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