二乙酸荧光素(FDA)多少钱

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名称：二乙酸荧光素(FDA)多少钱
编号：ZN1972
规格：1g/5g
品牌：百奥莱博
产地：北京
产品性状：白色固体粉末
产品保存：避光-20℃保存，一年有效
产品说明：
二乙酸荧光素(Fluorescein Diacetate,FDA)是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料，其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异：FDA本身不产生荧光，也无极性，能自由渗透出入完整的细胞膜。当FDA进入活细胞后，被细胞内的脂酶分解，生成有极性的、能产生荧光的物质——荧光素，该物质不能自由透过活的细胞膜，积累在细胞膜内，因而使有活力的细胞产生绿色荧光；而无活力的细胞因不能使FDA分解，而无法产生荧光。FDA也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别是488nm和530nm。
使用方法：
(1)配制溶液：将FDA溶于丙*(代"酮")中，配成浓度为5mg./ml的溶液，置于4℃冰箱中保存。染色时将FDA加入到细胞液中，使其终浓度为100μg/ml。
(2)活细胞染色：取处于对数增长期的细胞液，离心浓缩，生理盐水清洗1次，加入FDA，在室温黑暗处放置5min染色；染色后离心，生理盐水清洗1-2次，最后用蒸馏水悬浮细胞，涂片观察。
(3)死亡细胞胞染色：取鲁哥氏溶液固定的死亡细胞按活细胞相同的方法进行染色。
(4)观察：用荧光显微镜观察和拍照(明场和荧光分别拍照，物镜使用20×)。活细胞被FDA染成亮绿色，当细胞膜受损，荧光素无法在细胞内累积，而使细胞无法发出荧光。活性高的细胞发出强烈的绿色荧光，活性弱或死亡的细胞发光较弱或不发光。
注意事项：
(1)使用方法可依据细胞的具体情况适当调整。
(2)鲁哥氏即Lugol’s溶液，也就是碘液。取6克碘化*溶于20毫升蒸馏水中，搅拌到溶解后，加入4克碘，等碘充分溶解，再加入80毫升蒸馏水，贮存在棕色
试剂瓶内。

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SNM089 高铁血红蛋白测定试剂盒(比色法) Methaemoglobin assay kit
GL0144 M9盐溶液(5×,pH7.4) 500ml
GL1302 Taq稀释缓冲液 100ml
GL0907 花粉活力染色液(TTC法) 10ml|50ml
GL1976 尿酸(UA)检测试剂盒(磷钨酸比色法) 50T
SK159 糖原含量检测试剂盒 Glycogen assay kit
SNM432 WB洗涤液(10×) WB scrubbing solution
GL0629 淀粉样物质染色液(Puchtler碱性刚果红法) 4×50ml
GL1740 无菌双蒸水 100ml|500ml
SNM548 MEM培养基(含非必需*基酸，含核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸) MEM medium
SNM230 肌酐测定试剂盒(肌*酸氧化酶法)(微板法) Creatinine (Cr) Assay kit ( sarcosine oxidase )
GL0330 吖啶橙荧光染色试剂盒 100T
GL1484 BCA蛋白定量试剂盒 250T|500T
SNM347 TTC染液 TTC Stain Kit
SNM029 多酚氧化酶测试盒(比色法)
GL0049 D-Hanks平衡盐溶液(无酚红) 1×|5× 500ml
GL1237 TLE溶液(pH8.2) 500ml
GL0815 姬姆萨染色液(1:9) Giemsa stain 100ml|500ml
GL1911 丙*(代"酮")酸检测试剂盒(二硝基*(代"*")肼微板法) 100T
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·SPRY4 mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN1309
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：human
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液2ml；
3.SPRY4 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml；
4.封闭液5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxin5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxin：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
SPRY4的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。


二乙酸荧光素(FDA)多少钱关键词：百奥莱博,二乙酸荧光素,ZN1972,二乙酸荧光素(FDA)

GL2072 腺苷脱*酶(ADA)检测试剂盒(波氏微板法) 100T
SK242 单胺氧化酶检测试剂盒 Monoamine oxidase assay kit
GL1169 Tris-磷酸电泳缓冲液(10×TPE,RNase free) 500ml
SNM086 乙酰胆碱测定试剂盒(测组织)(微板法) Acetylcholine assay kit
GL1844 活化部分凝血活酶时间(APTT)检测试剂盒(凝固法) 50T|100T
SK038 过氧化*检测试剂盒 H2O2 Test Kit
GL0903 福尔根DNA染色液 Feulgen Staining Solution 3×50ml
GL1973 肌酐(Cr)检测试剂盒(去蛋白终点微板法) 100T
GL1580 DTNB溶液(pH8.0) 100ml
SNM429 WB内参阳性对照 WB internal reference positive control
GL0626 淀粉样物质染色液(Bennhold刚果红法) 5×50ml
GL0169 精子细胞BWW培养基储存液 500ml
GL1333 Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH9.0,RNase free) 500ml

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