人IL17A重组蛋白 分子生物学试剂

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名称：人IL17A重组蛋白 分子生物学试剂
编号：ZN1653
规格：100ng
品牌：百奥莱博
产地：北京
来源：大肠杆菌
特异性：人
应用：WB阳性对照
形态：冻干粉
纯度：>98%，RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件：-20℃保存1年以上，避免反复冻融。

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BTN131087 AP标记亲和素 AP-Avidin
KFS032 即用型免疫组织化学SP试剂盒(Rabbit)
SY0258 EveGreen (20×in water) EveGreen(20×水溶液)
YT344 NF-κB抑制剂/抗氧化剂(PDTC) Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate
BTN130887 植物叶绿体蛋白提取试剂盒 Plant Chloroplast Protein Extraction Kit 
ALH613 重组人BFGF Recombinant human basic fibroblast growth factor
SV0913 LongAmp 热启动 Taq DNA 聚合酶
WE0395 口腔拭子DNA样本保存管
BTN90313 TBE电泳液，10× 10×TBE Buffer
SV1380 T4 RNA 连接酶 2，截短型 KQ
RFT198 蛋白酶抑制剂混合物(植物蛋白提取用) Protease inhibitor cocktail for plant cell and tissue extracts
KFS276 阿霉素(Doxorubicin) Adriamycin,Doxorubicin
SY0513 分散酶II Dispase II
SV0544 NlaIII限制性内切酶 NlaIII Restriction Endonuclease
BTN130606 全血直接扩增Taq DNA聚合酶 Blood-Direct Taq Polymerase
HR0462 AO/PI双染试剂盒 AO/PI double staining kit
人IL17A重组蛋白 分子生物学试剂关键词：ZN1653,百奥莱博,人IL17A重组蛋白


·VEGF mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN1473
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：human,rat,mouse,rabbit
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液2ml；
3.VEGF mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml；
4.封闭液5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxin5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxin：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
VEGF的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。


人IL17A重组蛋白 分子生物学试剂关键词：ZN1653,百奥莱博,人IL17A重组蛋白

KFS173 *离子荧光探针 MEQ (6-甲氧-N-乙基喹*(代"啉")碘)(CoFM FACS) MEQ(MQAE)
SY0412 27mm透析袋(透析分子量7kDa) Dialysis Tube MD34 (Mw7,000)
SV0248 BstBI限制性内切酶 BstBI Restriction Endonuclease
BTN81210 Western印迹膜封膜液(NC膜和PVDF膜) Western Blot Blocking Buffer
HR0285 变性蛋白裂解液 Denatured protein solution
SY0050 通用型全血PCR试剂盒 Animal Blood Direct PCR Kit
BTN130818 HRP标记的链霉亲和素 Streptavidin，HRP conjugated
BTN51208C dNTP溶液(100mM) dNTP Solution，100mM
SV1599 5-Aza-dc 处理的 Jurkat 基因组 DNA
YT339 sGC抑制剂(NS-2028) soluble Guanylyl Cyclase Inhibitor
BTN130888 石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒 FFPE Total Protein Extraction Kit
BTN80901 柱式动物RNA大量提取试剂盒 Animal RNA Column large-scale extraction kit
SV0904 热启动 Taq DNA 聚合酶
WE0327 Alexa Fluor 488/PI细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit 
KFS070 10×WB洗涤液(TBS) Western Blot Wash Buffer(10×) in TBS

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