即用型免疫组化试剂盒(SABC-POD)(兔IgG)库存

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名称：即用型免疫组化试剂盒(SABC-POD)(兔IgG)库存
编号：ZN1827
规格：1盒
品牌：百奥莱博
产地：北京
适用一抗为兔 IgG，标本为培养细胞或冰冻切片的免疫组化
产品规格：1KIT
保存条件：4℃可保存一年，应避免冷冻。
工作原理：
SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力，等电点 pI=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低。
根据研究，大量的过氧化物酶可以保证 SABC 具有很高的敏感性。所以 SABC 兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。
冰冻切片和培养细胞做免疫组化时，由于内源性抗体的抗原性完好保存，一般免疫组化试剂盒就会碰到严重的背景染色问题，尤其是丙*(代"酮")固定的标本。本试剂盒所用的二抗是生物素标记的抗兔 IgG，具有高度的特异性，不和兔以外任何抗体起反应，所以不会因二抗引起背景染色。此外，本试剂盒也能用于兔标本石蜡切片的免疫组化，背景染色优于普通试剂盒。
试剂盒内容：
1．5%BSA 封闭液 6ml/12ml
2．生物素标记抗兔 IgG 6ml/12ml
3．SABC 6ml/12ml
冰冻切片染色步骤：
1．取出切片，浸于 PBS 中复温 30分钟。
2．灭活。30%H2O2 1 份+纯甲醇 50 份混合,室温浸泡 10分钟，以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2次。
3．根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
4．封闭。5%BSA 封闭液 37℃孵育30分钟，甩干，勿洗。
5．滴加一抗(兔 IgG)，37℃孵育1-2 小时或 4℃过夜。PBS冲洗，5分钟×3次。
6．滴加生物素标记抗兔 IgG，37℃孵育30分钟。PBS冲洗，5分钟×3次。
7．滴加 SABC，37℃孵育30分钟。PBS冲洗，5分钟×3次。
8．显色液显色，镜下控制反应时间。显色剂可选 DAB或AEC。自来水充分冲洗。
9．根据需要进行苏木素复染，染色时间为0.5-2分钟。脱水，透明。
10．选用中性树胶，水溶性封片剂(AR1018)或其他适当的封片剂封片。
建议：
1．对于 AP(碱性磷酸酶)显色系统，请用不含磷酸根的缓冲液洗涤，如 TBS 缓冲液。
2．热修复可选用枸橼酸盐缓冲液、EDTA 抗原修复液、PBS 缓冲液、TBS 缓冲液等作为抗原修复液。
3．酶修复可选用复合修复液、抗原修复液Ⅰ(与热修复配合使用)、胰蛋白酶、胃蛋白酶消化组织。

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SK010 醇脱*酶检测试剂盒 Alcoholdehydrogenase Test Kit；ADH Test Kit
GL0865 幽门螺旋杆菌染色液(亚甲蓝法) 100ml
GL0413 软骨染色液(阿利新蓝法,pH2.5) 2×50ml
GL1550 通用显影液 500ml
SNM401 甲叉-双丙*(代"烯")酰胺(粉剂) Methylene - bisacrylamide
SNM084 乙酰胆碱测定试剂盒(测培养液)(微板法) Acetylcholine assay kit
GL0139 LB培养基 500ml
GL1297 RNA杂交缓冲液(无甲酰胺) 100ml
SNM200 谷胱甘肽过氧化物酶测定试剂盒(比色法) Glutathione Peroxidase (GSH-PX) assay kit
GL1971 肌酐(Cr)检测试剂盒(PA速率微板法) 100T
SK153 中性转化酶检测试剂盒 NI Test Kit
GL1060 硼*(代"酸")溶液 4mol/L 500ml
GL2106 总超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(NBT核黄素微板法) 100T
GL1733 水合*醛溶液 10% 100ml|500ml
SNM543 DMEM / F-12(1∶1)培养基(不含15mM HEPES) DMEM / F-12 (1:1) medium
GL0773 黑色素染色液(硫*(代"酸")亚铁法) 3×50ml|3×100ml
GL0325 碘化丙啶PI染色液(DNA染色) 50ug/ml 10ml
GL1476 RIPA裂解液(强,无抑制剂) 100ml
SNM341 刚果红染液(淀粉样变性染色液) Congo Red Stain
GL0484 中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 4×2ml|4×10ml
GL0039 磷酸缓冲盐溶液(含**) 1×PBS 500ml
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GL0218 *化*(代"*")-EDTA溶液(0.15mol/L) 100ml
SK093 线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒 Mitochondrial respiratory chain complex II activity detection kit
GL0979 草酸水溶液 1%|2% 500ml
GL2035 β-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAG)检测试剂盒(PNP比色法) 50T
GL1662 Tween 20溶液(10%,无菌) 100ml
SNM483 即用型正常山羊血清 Normal goat serum
GL0709 碱性品红指示剂 100ml
GL1813 EDTA.2K抗凝剂(10×) 100ml
GL1404 Tris-甘*酸电泳粉剂(5×) 1L
SNM282 纤维蛋白原测试盒(半自动凝血仪) Fibrinogen Assay Kit
GL0410 碱性固绿染色液 2×50ml
GL1545 Western抗体洗脱液(碱性) 100ml|500ml
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·RON mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN1232
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman,rat
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.RON mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
RON的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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