人碳酸酐酶9(CA9)ELISA试剂盒说明书

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括人碳酸酐酶9(CA9)ELISA试剂盒说明书在内的一系列ELISA试剂盒产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：人碳酸酐酶9(CA9)ELISA试剂盒说明书
编号：ZN2050
规格：96T
英文名：Human Carbonic anhydrase 9 ELISA Kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法，用于体外定量分析人血清、血浆、尿液、细胞裂解液和细胞培养上清中CA9的含量。预先包被的抗体为CA9单克隆抗体，检测相抗体为CA9单克隆抗体，经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人CA9呈正相关。

碳酸酐酶9(Carbonic anhydrase 9,CA9)是新发现的碳酸酐酶家族异构体之是由酸性*基酸组成的跨膜糖蛋白，在调控细胞增殖、转化方面有重要作用。它能催化CO2水解为碳酸和水，参与机体的酸碱平衡，调节细胞内外pH值，有利于肿瘤的生长和转移。Carbonic anhydrase 9位于VHL肿瘤抑制基因的下游，由HIF-1途径激活，在正常组织中表达极低，在肾细胞癌中高度表达，是其特异性抗原。

检测指标：Carbonic anhydrase 9；CA9；Renal cell carcinoma-associated antigen G250；RCC-associated antigen G250
检测范围：15.6pg/ml～1000pg/ml
特异性：系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性：＜1pg/ml

产品组成：

 

组分	规格	数量
预包被抗人CA9抗体的96孔板	96T	1板
重组人CA9标准品(冻干)	1ng/管	2管
生物素标记抗人CA9(100X)	130μl	1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)	130μl	1管
样品稀释液	30ml	1瓶
抗体稀释液	12ml	1瓶
ABC稀释液	12ml	1瓶
TMB显色液	10ml	1瓶
TMB终止液	10ml	1瓶
洗涤缓冲液(25X)	20ml	1瓶
封板膜		4张

储存条件：2-8℃（频繁使用时），-20℃（长时间不用时）。
有效期：6个月(4℃)；12个月（-20℃）。

样品的准备和保存：
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
细胞培养上清：离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
血清：用干净试管收集血液，室温凝固30分钟，1500×g离心15分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
血浆：采用肝素或EDTA抗凝，抽血后30分钟内在2-8℃温度下，1500×g离心15分钟。为消除血小板的影响，建议在2-8℃进一步10000×g离心10分钟。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞裂解液：对于贴壁细胞，去除培养液，PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常10秒后，细胞就会被裂解。对于悬浮细胞，离心收集细胞，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打把细胞吹散，用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

样品稀释的一般原则：
用户须估计样品待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。根据待测因子含量高、中、低的不同，分别采取不同的稀释方案：
高：指待测因子在10～100ng/ml，一般按1:100稀释，297μl样品稀释液加3μl样品。
中：指待测因子在1～10ng/ml，一般按1:10稀释，225μl样品稀释液加25μl样品。
低：指待测因子在15.6～1000pg/ml，按1:2稀释，100μl样品稀释液加100μl样品。
特低：指待测因子≤15.6pg/ml，样品一般不做稀释，或按1:2稀释。
以上方案仅供参考，样品的稀释应有详细记录。

参考标准曲线数据：(取自某一批次质检数据，仅供参考，用户需要自己建立标准曲线)

浓度(pg/ml)	0	15.6	31.2	62.5	125	250	500	1000
OD值	0.03	0.086	0.128	0.231	0.395	0.77	1.506	2.265

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