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- 百奥莱博
- SY0318-ZBK
- 北京
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
886
- 英文名：
Lysis Buffer for WB/IP Assays
- 保质期：
12个月
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液厂商，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
名称：免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液
编号：SY0318
规格：100ml
英文名：Lysis Buffer for WB/IP Assays
品牌：百奥莱博
产地：北京
本品细胞/组织裂解液，WB/IP裂解液，是一种非变性条件下的裂解液，含有sodiu*(代"m") pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、sodiu*(代"m") orthovanadate和leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解，并能维持原有的蛋白间的相互作用。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP和Co-IP等实验。
注意事项
1）需自备PMSF。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3） 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（SY0298）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
(一) 细胞样品
1）融解WB/IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×105～1×106个细胞/管，然后再裂解。因为大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。
（二）组织样品：
1）把组织剪切成细小的碎片。
2）融解WB/IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3）按照每20mg组织加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。
关键词：WB/IP,免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液,SY0318,Lysis Buffer for WB/IP Assays
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| 编号 | 名称 |
| SY0126 | ERRβ-Luc荧光素酶报告基因质粒 |
| SY0623 | Silwet L-77 |
| SY0425 | V5 Tag多肽 |
| SY0242 | 二甲基腔肠素 |
| SY0282 | 零背景TOPO-TA克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点) |
| SY0660 | 小鼠抗GFP-tag单克隆抗体 |
| SY0630 | 1-*乙酸(α-*乙酸) |
| SY0617 | 反玉米素 |
| SY0637 | HRP标记小鼠抗GAPDH单克隆抗体 |
| SY0654 | HRP标记小鼠抗HA-Tag单克隆抗体 |
| SY0621 | 赤霉素，赤霉素A3 |
| SY0170 | ISRE-GFP报告基因质粒 |
| SY0390 | 牛纤维蛋白原 |
| SY0272 | 固相RNase清除剂(含喷雾瓶) |
| SY0185 | ATF6-GFP报告基因质粒 |
| SY0616 | 玉米素 |
| SY0130 | HNF1-Luc荧光素酶报告基因质粒 |
| SY0174 | HNF4-GFP报告基因质粒 |
| SY0249 | *化乙锭 |
| SY0408 | 30ml重力层析空柱 |
| SY0467 | 碱性磷酸酶活性检测试剂盒 |
| SY0186 | AARE-GFP报告基因质粒 |
| SY0444 | 红色荧光标记人源高密度脂蛋白 |
| SY0526 | 哺乳动物细胞冻存液 |
| SY0227 | RORE-GFP报告基因质粒 |
| SY0511 | 台盼蓝 |
| SY0013 | XL10化学感受态细胞 |
| SY0364 | 10×Tris-Glycine Native电泳缓冲液 |
| SY0328 | 组织/细胞线粒体分离试剂盒 |
| SY0023 | pCMV/myc/mito 线粒体定位表达载体(哺乳动物细胞) |
| SY0320 | 10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂) |
| SY0100 | TCF/LEF1-Luc荧光素酶报告基因质粒 |
| SY0269 | 总RNA提取试剂(同Trizol) |
| SY0427 | S-Tag 多肽 |
| SY0148 | HIF-1-Luc报告基因慢病毒颗粒 |
| SY0089 | c-Jun-Luc荧光素酶报告基因质粒 |
| SY0568 | iFluor 555标记鬼笔环肽(橘色) |
| SY1066 | Bcl-2抑制剂(GDC-0199) |
| SY0652 | 小鼠抗HA-Tag单克隆抗体 |
| SY0065 | Sox2 萤火虫荧光素酶报告基因质粒 |
| SY0479 | Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒 |
| SY0112 | STAT5-Luc荧光素酶报告基因质粒 |
| SY0292 | 第一链cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(+gDNA wiper) |
| SY0592 | 高尔基体绿色荧光探针 |
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文献和实验在 WB 和 IP 实验中，破碎细胞或组织与选择和配制裂解液一样重要。比起一些更软的组织（如脑组织），在准备 WB 或 IP 的样品时，紧密的纤维组织（如肌肉组织）需要更剧烈的方法；对于培养的原代细胞或细胞系，在准备 WB 和 IP 的样品时需要一定的机械搅拌去提取蛋白。机械破碎样品常规的方法和设备如下：组织高速匀浆仪通常破碎体积大的植物或者动物组织需要用可旋转、带有刀片的匀浆仪或者搅拌器 .这些仪器通常通过一个电动的马达带动不锈钢可旋转切割刀片，可以从顶部或者底部启动，这个过程中产生很少热量
糖，建议进行 Pre-clear；如果使用磁珠，此步可忽略 抗 X 抗体的轻链（25 kD）和重链（50 kD） 更侧重于如何在实验上进行优化（见下文） *注意：总蛋白上样量过多也会造成 非特异性结合，建议上样量为 500 ug-1 mg。上样之前一定要先用 BCA 定个量！定个量！定个量！ pre-clear：上样前先用裂解液过一遍柱子，减少基质本身对蛋白的吸附 Output：在某些 co-IP 实验中，实验人员会把IP后的上清分别进行诱饵蛋白 X 和靶蛋白 Y 的 WB 检测
/bbs/post/view?bid=65&id=2909141&sty=3&keywords=%C1%D1%BD%E2%D2%BA 新手请教做IP的细胞裂解液配方 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=2730823&sty=3&keywords=%C1%D1%BD%E2%D2%BA (请教)如何用组织裂解液上质谱 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3014748&sty=3&keywords
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