SMAD-Luc荧光素酶报告基因质粒哪里卖

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括SMAD-Luc荧光素酶报告基因质粒哪里卖在内的一系列细胞生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：SMAD-Luc荧光素酶报告基因质粒哪里卖
编号：SY0101
规格：1μg
英*(代"文")名：SMAD luciferase reporter plasmid
品牌：百奥莱博
产地：北京
SMAD荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（SMAD luciferase reporter plasimd）是用于检测SMAD转录活性水平为目的的报告基因。SMAD(drosophila mothers against decapentaplegic )蛋白家族在将TGF-β信号从细胞表面受体传导至细胞核的过程中起到关键性作用，且不同的Smad介导不同的TGF-β家族成员的信号转导。TGF-β信号通路涉及细胞的增殖和分化 ,在肿瘤发生与进展、细胞外基质形成和免疫调节等过程中发挥重要作用。

SMAD报告基因主要用于检测细胞中Smad调控的信号通路的活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMSMAD-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个SMAD结合位点，可以高灵敏度地检测SMAD的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得SMAD报告基因质粒更易于转染。
质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
1.pSMAD可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
2.SMAD的激活剂，可作为SMAD报告基因的阳性对照。

储存条件：-20℃。

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·第一条链 cDNA合成试剂盒
编号：SY0290
英*(代"文")名称：First Strand cDNA Synthesis Kit
规格：50T
本试剂盒是基于Reverse Transcriptase，该酶热稳定性提高，在50℃的半衰期超过240min，且可长时间耐受高达55℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录，能稳定可靠地合成cDNA。且Reverse Transcriptase的独特设计，进一步增强了模板亲和力和行进性，使得全长cDNA的合成能力有了大幅度提升，可获得长达20 kb的cDNA，并且对于常见的逆转录抑制物具有更高的耐受度，非常适合于植物组织RNA的逆转录反应。

本试剂盒包含由总RNA或mRNA合成高质量第一条链cDNA所需的所有成分，并提供两种cDNA合成引物：Random hexamers和oligo（dT）18。合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR、qPCR以及PCR克隆。其中，5×RT Mix包含优化的缓冲体系和dNTP； Enzyme Mix包含Reverse Transcriptase和RNase inhibitor。可根据需要，选择Oligo (dT)18、Random hexamers或基因特异引物作为逆转录引物。

试剂盒组分：

 

组份	规格
RNase free ddH2O	1 ml
5×RT Mix	200 μl
Enzyme Mix*	50 μl
Oligo dT18 (0.5 μg/μl)	50 μl
Random hexamers (N6)	50 μl
*包含RNase inhibitor，用于抵抗环境和体系中可能存在的痕量的RNase。

储存条件：-20℃，有效期一年。

质量控制

所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留。
功能检测1：以500 ng mouse total RNA为模板，Oligo dT18为引物，50℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增ne*(代"b")ulin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的20.0 kb条带。
功能检测2：以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo dT18为引物，50℃反应30分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。
功能检测3：以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo dT18为引物，55℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测4：以1 pg-1 µg HeLa cell total RNA为模板，以Oligo dT18和Random hexamers为引物，测试qRT-PCR性能。

以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间。

客户需要准备的材料
1.RNase free的1.5 ml微量离心管或0.2ml PCR管
2.水浴锅或PCR仪
3.冰
4.RNA（高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的。

引物选择
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo dT18，其与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
2）基因特异性引物 (GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成。这时，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
3）Random hexamers特异性最低，所有RNA，包括mRNA、rRNA、tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random hexamers为引物。

应用实例

1 第一条链cDNA合成*（以20μl反应体系为例）
1）按照下表在RNase free离心管中配制如下混合液：

RNase free ddH2O	to 20 μl
Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)	1 μl
or Random Primer	or 1 μl
or Gene Speicific Primers	or 2 pmol
5×RT Reaction Mix	4 μl
Enzyme Mix**	0.8-1μl
模板RNA	Total RNA: 50 ng-5 μg/mRNA: 5-500 ng

*可选步骤（一般不需要）：如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却 5min，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
** Enzyme Mix非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请瞬时离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。可每次按照0.8μl使用，不会影响使用效果。

2）用移液枪轻轻吹打混匀。
3）如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)，42℃孵育30-50min。
如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育30-50 min。
4）65℃加热15 min(或者85℃加热5 min)失活Reverse Transcriptase。

2 RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。
1）建议反应条件
 

Components	Volume	Final Concentration
cDNA Template	2 μl	as required
Forward Primer (10 μM)	1 μl	0.2 μM each
Reverse Primer (10 μM)	1 μl	0.2 μM each
10×Taq Buffer (含Mg2+)	5 μl	1×
2.5 mM dNTPs	4 μl	0.2 mM
Taq DNA Polymerase	0.5 μl	2.5 units
ddH2O to final volume	50 μl	Not applicable

注意事项
1）所有操作均应在冰上进行。
2）除使用RNase free的枪头和离心管外，RNA实验用的试剂建议专用，并在单独的洁净的区域操作。操作时，戴上口罩和一次性手套，避免说话。总RNA提取完成后，建议取少量跑1%琼脂糖凝胶电泳，检验RNA的完整性。
3）逆转录反应抑制物包括酚，盐，SDS，EDTA等。建议用75%乙醇 (用DEPC水配制)仔细洗涤RNA沉淀 (轻弹管底让沉淀悬浮，并静置数分钟)。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。






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·GATA-GFP报告基因质粒
编号：SY0177
英*(代"文")名称：GATA GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
GATA-GFP报告基因是用于检测GATA转录活性水平为目的的报告基因。GATA(globin transcription factor)转录因子家族包括6锌指结合蛋白调控细胞的增殖和分化。GATA家族成员涉及造血、心脏和消化道的发育。

GATA-GFP报告基因主要用于检测细胞中球蛋白信号通路、药物研究、基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMGATA-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个GATA结合位点，可以高效地检测GATA的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得GATA-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM GATA -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMGATA-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。


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SNM470 免疫组化用伊红染色液 Immunohistochemical stain with eosin
GL1626 Tris-HCl缓冲液(pH7.0) 1mol/L 100ml|500ml
GL0504 葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法) 3×50ml
SNM354 血管通透性测试(伊文思蓝)染液 Vasopermeability （Evan"s Blue）Stain Kit
SK079 土壤硝态氮检测试剂盒 Reagent kit for detecting nitrite content in food
GL1889 脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法) 50T|100T
GL0790 焦油紫染色液 0.06%|0.1% 100ml
SNM555 DMEM高糖培养基(含L谷*酰胺，不含丙*(代"酮")酸*，不含酚红，含HEPES) DMEM high glucose medium
GL0020 羧苄青霉素溶液(50mg/ml) Carbenicillin 50mg/ml 10ml
SNM011 脂肪酶测定试剂盒(微板法) Lipase assay kit
GL1073 碳酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH9.2) 500ml
GL1462 TSA溶液(pH8.0) 500ml

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