羰化青DiI(神经元示踪剂)说明书

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名称：羰化青DiI(神经元示踪剂)说明书
编号：KFS142
规格：10mg
品牌：百奥莱博
产地：北京
长链二烷基羰花青化合物，特别是Dil（分子量933.88），广泛应用于固定和非固定的组织与细胞中，进行顺行或逆行的神经示踪分析。Dil 不会影响细胞的活力、生长以及基本生理特性。Dil 标记运动神经元，可在培养基条件下持续跟踪长达四周，在体内长达一年。染料通过在质膜中的缓慢横向扩散均匀标记神经元，0.2～0.6mm/每天/固定标本，在活体组织里，可以达到6mm/每天。经过醛固定的组织，Dil 的扩增可以持续长达1～2年。一般情况下未标记的染料不会向非标记的细胞转移，除非质膜被破坏，比如切片部位。

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·Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO(10mM)
编号：KFS284
英文名称：Ac-DEVD-CHO
规格：100μl

分子式：C20H30N4O11
分子量：502.5
储存：-20℃，有效期12个月。
纯度：≥98%(HPLC)
浓度：10mM in DMSO

·细胞凋亡形态学检测试剂盒
编号：KFS285
英文名称：Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit
规格：100T
形态学检测是研究细胞凋亡的最基本方法。细胞凋亡的形态学变化是多阶段的，起初，细胞间连接和微绒毛消失，细胞体积缩小，胞浆凝缩，内质网变疏松并与胞膜融合，形成一个个空泡，核糖体与线粒体等细胞器聚集，结构尚无明显改变，细胞核内的染色质逐渐凝聚成新月状附在核膜周边，细胞核固缩呈均一的致密物，进而断裂成碎块，此时细胞膜仍保持完整：然后，胞膜及核膜不断出芽、脱落，一个细胞变成数个大小不等的有膜包裹的凋亡小体：最后凋亡小体被周围具有吞噬能力的细胞吞噬、消化。上述这些形态学的变化，可以通过本试剂盒中的染色及光学显微镜观察。

试剂盒组分：
Dye Reagent 1×10mL
Dye Reagent 2×1mL
Buffer A×10mL

注意事项：利用血球计数板进行该项操作时，不要用血计板配套的质地较硬的盖玻片，而用普通的盖玻片反而更利于结果的观察。

操作方法
1. 用适当的方法诱导细胞凋亡，消化收集细胞；
2. 用PBS 洗涤细胞二次，并调成浓度为1×106cells/ml 细胞悬液；
3. 吸取50~100μL 的细胞悬液均匀涂布于载玻片（A 片）上或用离心涂片机制片，室温晾干，甲醇固定5min；
4. 在A 片上滴加数滴100μL 的Dyes Reagent 1 室温染色1 min，用水轻轻洗去染液；
5. 在含体积分数为1%盐*(代"酸")的80%乙醇中分化10 s，流水冲洗1 min，晾干，显微镜下观察细胞的形态。
6. 在另一张涂有细胞并已于无水乙醇固定2min 的载玻片（B 片）上滴加100μL 染色液2（Dyes Reagent2 ：Buffer A=1:9 的混合液），室温染色5～20min，用水轻轻洗去染液，室温晾干；
7. 二甲*浸泡3 min，以去除杂质，使载玻片透明，最后树脂封片，显微镜下观察细胞形态；
8. 观察200-500 个细胞，计数凋亡细胞所占的比例。

结果分析A 片：凋亡细胞皱缩，胞膜完整。染色质凝聚，嗜碱性增强，染成深蓝色，呈环状或新月状附在核膜周围，或细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒，核膜消失。而坏死细胞体积增大，染色质变稀疏成网状，嗜碱性减低，染成淡蓝色，胞核破碎，细胞膜不完整。

B 片：凋亡细胞皱缩，胞膜完整。胞浆稀少或缺乏，染成淡红色，染色质凝聚，染成深紫色，细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒。

计算细胞凋亡率和死亡率：
细胞凋亡率=凋亡细胞/细胞总数×100%
细胞死亡率=坏死细胞/细胞总数×100%

储存：RT,避光，有效期12个月。


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·瑞氏-姬姆萨复合染液
编号：KFS111
规格：250ml×3
瑞氏-姬姆萨染液主要应用于血液和骨髓涂片染色。

试剂组成：
试剂一：250ml*1 瓶
试剂二：250ml*2 瓶

操作步骤：
1. 平置血涂片于染色架上，滴加试剂一3-5 滴，使其迅速盖满血膜，染色1 分钟左右，以固定血片。
2. 不要倒丢试剂一，直接滴加试剂二6-10 滴，轻摇玻片或用洗耳球对准血涂片吹气使染液充分混合，染5-8分钟。
3. 水洗30 分钟，待干后镜检。

染色结果：
1. 红细胞呈浅红色，中央稍淡而略有蝶形态。
2. 白细胞系统清晰易分，细胞膜清晰呈紫黑色，细胞核着色呈深浅不同的紫红色，胞浆中各种颗粒区分明显。其中中性粒细胞浆中颗粒呈淡紫红色，嗜酸粒细胞浆中颗粒呈桔红色、嗜碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝褐色。单核细胞的胞浆呈灰蓝色，胞浆中颗粒呈细小淡紫红色或蓝紫色。淋巴细胞胞浆呈淡蓝色。


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·活细胞核染料吖啶橙
编号：KFS145
英文名称：Acridine Orange；AO
规格：25mg
吖啶橙是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm。阻断滤光片波长515nm。它与细胞中DNA 和RNA 结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA 结合量少发绿色荧光，与RNA 结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA 染色。

在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO 常与*化乙啶EB 合用双染，因EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

用于细胞核染色时，推荐的吖啶橙工作浓度为0.1%。一般孵育条件是室温避光15 分钟。由于不同细胞对吖啶橙的摄取能力不同，该法不一定适用所有细胞。

储存：-20℃，避光，有效期12月。

北京百莱博科技有限公司是细胞组织染色产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购羰化青DiI(神经元示踪剂)说明书。