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沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒供应

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  • ¥4200 - 5800
  • 百奥莱博
  • SYA255-VSP
  • 北京
  • 2025年07月08日
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      北京百奥莱博科技有限公司

    特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

    北京百奥莱博供应的沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒供应用于生化科学研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒等细菌PCR检测试剂盒产品请联*(代"系")我司咨询订购。


    名称:沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒供应
    编号:SYA255
    规格:48次/盒
    品牌:百奥莱博
    产地:北京
    一、简介:
    本试剂盒用一对沙门氏菌特异性引物,对沙门氏菌DNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

    二、用途:
    该试剂盒适用于增菌培养物、疑似病料及食品中沙门氏菌(Sal)的特异性检测,用于沙门氏菌(Sal)的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。

    三、试剂盒组成:(48T)
    组份 数量 规格
    沙门氏菌PCR反应液(Sal-PCR MIX) 1管 720μL/管
    DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
    阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
    阳性对照(JEV-PTC) 1管 50μL/管

    四、储存条件及有效期:
    本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。

    五、PCR仪器适用范围
    ABI系列,Roche系列等PCR检测仪等。

    六、样品的采集与DNA提取
    6.1 样品的采集
    6.1.1 食品样品:样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》(GB 4789.4-2010)要求进行。
    6.1.2 粪便样品:取粪便置于灭菌的收集管中送检。
    6.1.3 病灶部位样品:取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
     注:上述样品建议经过增菌后,收集培养物用于检测。
    6.2 DNA提取
    可采用PCR试剂盒配备的DNA 抽提液,按以下说明进行DNA 核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA 提取试剂盒(过柱法-凝胶配套),并按照相应试剂盒说明进行操作。
    6.2.1 培养物:取培养物50μL(培养至一定浊度)或者挑取单克隆菌落与50μL DNA 抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min,取上清5μL 进行PCR 反应。
    6.2.2 粪便样品:挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中,加入0.5mL 生理盐水,振荡混匀,13000rpm 离心3 分钟,弃上清,沉淀中加入50μL DNA 抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min 取上清5μL进行PCR反应。
    6.2.3 其他液体标本:取标本2-3mL,13000rpm 离心3min,弃上清,沉淀中加入50μL DNA 抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min 取上清5μL进行PCR反应。
     注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

    七、检测步骤:
    7.1 试剂的准备
    从试剂盒中取出PCR 反应液(Sal-PCR MIX),室温融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
    设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
    试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
    PCR反应液 15µL N×15µL
    向设定的N个PCR 反应管中分别加入15μL PCR 反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Sal-PTC)5μL,10000rpm 瞬时离心10秒。
    7.2 PCR反应条件
    将各反应管放入PCR仪器的反应槽内。
    推荐循环条件:
    预变性 1循环 94℃ for 2 min
    PCR扩增 35循环 94°C for 30 sec
    58°C for 30 sec
    72°C for 30 sec

    八、结果分析:
    (1) 称取1.5g琼脂糖放于250mL锥形瓶中,加入100mL 1×TAE电泳缓冲液,微波炉加热溶解,稍冷后加入10μL染色液混匀,倒入插有梳子的制胶板中。
    (2) 待胶凝固后,取10μL Maker(推荐使用DL2000 Maker)点样于左侧凝胶孔中,取10μL PCR产物依次点样于凝胶孔中,电压值设定为电泳槽正负极距离(cm)与5(V/cm)的乘积。待*酚兰指示剂电泳至凝胶中部时停止电泳并使用凝胶成像仪或紫外透照台观察结果。


    九、结果分析:
    (1) 阴性对照(NTC):无任何的条带(引物带除外)。
    (2) 阳性对照(Sal-PTC):在260bp处有条带。
    (3) 被检样品:在260bp处有条带为阳性样品,否则为阴性样品。
    (4) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。

    沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒供应
    想要了解更多关于沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒供应的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联*(代"系")。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:

    ·猪附红细胞体病ELISA检测试剂盒
    编号:SYA642
    等级:科研实验专用
    规格:96次/盒

    ·肠出血性大肠杆菌(O104:H4)单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA083
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·Nipah病毒单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA237
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·脊髓灰质炎病毒3型单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA207
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·鸭源性成分单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA292
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒
    一、简介
    本试剂盒用一对鸭源性成分特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用荧光PCR技术对鸭源性成分DNA进行体外扩增检测。本试剂盒中鸭源性成分的探针报告基团为FAM。

    二、用途
    该试剂盒适合于各种饲料及其它样品中鸭源性成分的检测。

    三、试剂盒组成(48T)
    组成成分 数量 规格
    鸭物种荧光qPCR反应液(Duck-qPCR MIX) 1管 720μL/管
    阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
    阳性对照(Duck-PTC) 1管 50μL/管

    四、储存条件及有效期
    本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。

    五、荧光PCR仪器适用范围:
    ABI系列,Bio-Rad系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

    六、样品采集与DNA提取
    6.1 样品采集
    样品的采集按照国家标准《饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应(PCR)法》(GB/T 20190-2006)要求进行。
    6.2 DNA提取
    可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
     注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

    七、检测步骤:
    7.1 试剂的准备
    从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Duck-qPCR MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
    设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
    试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
    荧光PCR反应液 15µL N×15µL
    向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Duck-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
    7.2 qPCR反应条件
    将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
    推荐循环条件:
    1循环 50℃ for 2 min
    预变性 1循环 95℃ for 10 min
    PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

    八、结果分析
    8.1 结果分析条件设定
    直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
    8.2 试验成立判定
    (1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
    (2) 阳性对照(Duck-PTC):均产生扩增曲线。
    (3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
    8.3 结果判定
    (1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明鸭源性成分核酸阳性。
    (2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明鸭源性成分核酸阴性。
    (3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
    (4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行鸭源性成分qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明鸭源性成分核酸阳性;否则判为样本阴性。

    九、注意事项:
    (1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
    (2) 所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
    (3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
    (4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
    (5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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    沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒供应

    ·金黄色葡萄球菌单重凝胶PCR检测试剂盒
    编号:SYA258
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·产毒副溶血弧菌单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA009
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·肠致病性大肠杆菌(EPEC)单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA093
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·冠状病毒(NL63)单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA182
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·鸭源性成分单重荧光PCR检测试剂盒(定量)
    编号:SYA302
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·副结核(paratuberculosis)单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA503
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·西部马脑炎病毒单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA235
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·副溶血性弧菌毒素调控基因(TOXR)单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA071
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·金黄色葡萄球菌毒性休克综合征毒素(TSST-1)单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA038
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·沙门菌及痢疾杆菌单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA079
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·冠状病毒(HKU)单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA180
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·甲型H1N1流感病毒单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA147
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·幽门螺旋杆菌(HP)单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA095
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒
    一、简介
    本试剂盒用一对幽门螺旋杆菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对幽门螺旋杆菌核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

    二、用途
    该试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的幽门螺旋杆菌,用于幽门螺旋杆菌(HP)的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。

    三、试剂盒组成(48T)
    组份 数量 规格
    HP反应液(HP-qPCR MIX) 1管 672μL/管
    DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
    酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
    阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
    HP阳性对照(HP-PTC) 1管 50μL/管

    四、荧光PCR仪器适用范围
    ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。

    五、储存条件及有效期:
    本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。

    六、样品采集、前处理与DNA提取
    6.1 样品采集
    水样便取0.5-1mL;疑似污染的食物取1g。
    6.2 样本前处理:
    水样便1300rpm离心2min,去尽上清;疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中;疑似污染的水直接取100μL。
    6.3 DNA提取
    可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
    6.3.1液体培养物:取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中,8000rpm离心3min,尽量吸弃上清,加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。
    6.3.2固体培养物:挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。
    6.3.3 粪便样品:挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中,加入0.5mL生理盐水,振荡混匀,13000rpm离心3分钟,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
    6.3.4 其他液体标本:取标本2-3mL,13000rpm离心3min,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
     注:建议采用相关标准方法进行前增菌,并按照6.3.1方法进行提取。阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

    七、检测步骤:
    7.1 试剂的准备
    从试剂盒中取出荧光PCR反应液(HP-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
    设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
    试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
    荧光PCR反应液 14µL N×14µL
    酶混合液 1µL N×1µL
    总量 15µL N×15µL
    计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(HP-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
    7.2 qPCR反应条件
    将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
    推荐循环条件:
    1循环 50℃ for 2 min
    预变性 1循环 95℃ for 10 min
    PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

    八、结果分析
    8.1 结果分析条件设定
    直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
    8.2 试验成立判定
    (1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
    (2) 阳性对照(HP-PTC):均产生扩增曲线。
    (3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
    8.3 结果判定
    (1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明幽门螺旋杆菌核酸阳性。
    (2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明幽门螺旋杆菌核酸阴性。
    (3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
    (4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行幽门螺旋杆菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明幽门螺旋杆菌核酸阳性;否则判为样本阴性。

    九、注意事项:
    (1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
    (2) 所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
    (3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
    (4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
    (5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



    沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒供应关键词:百奥莱博,SYA255,沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒
    沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒供应

    ·空肠弯曲菌单重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA010
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Campylobacter jejuni
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·高致病性禽流感H5N1病毒双重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA153
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Campylobacter jejuni
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒

    ·甲型H3N2流感病毒双重荧光PCR检测试剂盒
    编号:SYA150
    英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Campylobacter jejuni
    等级:科研实验专用
    规格:48次/盒
    一、简介:
    本试剂盒用一对甲型H3流感病毒特异性引物,一对甲型N2流感病毒特异性引物,分别结合一条特异性荧光探针,用一步法双重荧光RT-PCR技术对甲型H3流感病毒RNA、N2流感病毒RNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中甲型H3流感病毒的探针报告基团为FAM,N2流感病毒的探针报告基团为HEX/VIC/JOE。

    二、用途:
    本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子、泄殖腔拭子、组织样品等临床样品中甲型H3流感病毒和N2流感病毒的特异性检测。适用于甲型H3N2流感病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供临床参考。

    三、试剂盒组成:(48T)
    组份 数量 规格
    H3N2荧光qRT-PCR反应液(H3N2-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
    酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
    无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
    阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
    H3N2阳性对照(H3N2-PTC) 1管 50μL/管

    四、储存条件及有效期:
    本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为9个月,反复冻融次数不宜超过5次。

    五、荧光PCR仪器适用范围:
    ABI系列,Stratagene MX系列,Bio-Rad系列等荧光定量PCR检测仪等。

    六、样品的采集与RNA提取
    6.1 样品的采集
    按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
    6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
    6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
    6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
    6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
    6.2 RNA提取
    可采购北京百奥莱博科技有限公司的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
     注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

    七、检测步骤:
    7.1 试剂的准备
    从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(H3N2-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
    设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
    试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
    荧光PCR反应液 14µL N×14µL
    酶混合物 1 µL N×1µL
    总量 15µL N×15µL
    计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(H3N2-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
    7.2 qRT-PCR反应条件
    将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
    推荐循环条件:
    反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
    预变性 1循环 95℃ for 10 min
    PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
    60℃ for 45 sec
    在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM和HEX/VIC/JOE。其中FAM基团检测H3,HEX/VIC/JOE基团检测N2,淬灭基团均为None。

    八、结果分析:
    8.1 结果分析条件设定
    直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
    8.2 试验成立判定
    (1) 阴性对照(NTC):FAM和HEX/VIC/JOE通道的Ct值>43或无Ct值。
    (2) 阳性对照(H3N2-PTC):FAM和HEX/VIC/JOE通道的Ct值≤30且有明显指数增长。
    以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效
    8.3 结果判定
    (1) FAM通道:Ct值≤40,H3亚型流感病毒核酸为阳性;Ct值>43或无Ct值为阴性样本,表明H3亚型流感病毒核酸阴性。Ct值在40-43个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明H3亚型流感病毒核酸阳性;否则判为样本阴性。
    (2) HEX/VIC/JOE通道:Ct值≤40,N2亚型流感病毒核酸为阳性;Ct值>43或无Ct值为阴性样本,表明N2亚型流感病毒核酸阴性。Ct值在40-43个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明N2亚型流感病毒核酸阳性;否则判为样本阴性。

    九、注意事项:
    (1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
    (2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
    (3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
    (4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
    (5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。




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