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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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冷藏
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括北京现货西尼罗病毒荧光PCR检测试剂盒特价优惠在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。
名称:北京现货西尼罗病毒荧光PCR检测试剂盒特价优惠
编号:SYA230
规格:48次/盒
品牌:百奥莱博
产地:北京

北京现货西尼罗病毒荧光PCR检测试剂盒特价优惠极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·猪流感抗体ELISA检测试剂盒
编号:SYA641
等级:科研实验专用
规格:192次/盒
·猪乙型脑炎抗体ELISA检测试剂盒
编号:SYA639
等级:科研实验专用
规格:192次/盒
·星状病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA204
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规格:48次/盒
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规格:48次/盒
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规格:10次/盒|48次/盒
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编号:SYA007
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·Nipah病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA237
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·禽流感病毒H7N9(AIV-H7N9)双重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA336
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
等级:科研实验专用
规格:24次/盒|48次/盒
·沙门菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA058
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·脑脊髓炎病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA241
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对禽脑脊髓炎病毒特异性引物,结合一条特异性探针,用一步法荧光RT-PCR 技术对禽脑脊髓炎病毒RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途:
该试剂盒适合于检测脑组织、内脏组织、血液等标本中禽脑脊髓炎病毒(AEV)RNA,用于禽脑脊髓炎病毒(AEV)感染的辅助诊断及流行病学调查,其检测结果仅供参考
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
禽脑脊髓炎荧光qRT-PCR反应液(AEV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(AEV-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
病死或扑杀禽的脑部组织2g;待检活禽,用注射器取血5mL 至EDTA-2Na 抗凝管。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。
棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品:每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm 离心2min,取上清液100μL 于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(AEV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm 离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(AEV-PTC)5μL,10000rpm 瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(AEV-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明AEV核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明AEV核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行AEV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明AEV核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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·卵形疟原虫单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA126
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对卵形疟原虫特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用荧光PCR探针技术进行卵形疟原虫的检测。
二、用途:
本试剂盒可用于卵形疟原虫检测鉴定及突发公共卫生事件的处置,还可用于卵形疟原虫的环境监测、卫生检疫及感染的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
卵形疟原虫荧光PCR反应液(qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(DNA Polymerase MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
卵形疟原虫阳性对照(PTC) 1管 50μL/管
四、荧光PCR 仪器适用范围
ABI 系列,Bio-Rad 系列,Roche 系列等荧光定量PCR 检测仪等。
五、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃保存,避免反复冻融,有效期为6 个月。
六、实验操作步骤
6.1 标本采集
血液: 用一次性无菌5ml 注射器抽取疑似人或动物血3-5ml,置于枸橼酸*或EDTA2Na 抗凝管中,摇匀送检。
肺脏等组织:取上述组织1g左右,置于1.5ml洁净EP管中送检。
乳液、体液等标本:取相应标本3-5ml,转至1.5ml洁净EP管中送检。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
血液样本:直接取200μl 抗凝血,转至一洁净的1.5ml 离心管中,加入1ml 双蒸水,剧烈震荡30s,8000rpm 离心5min,弃上清,至无明显红色沉淀。(若沉淀明显,请再重复上述步骤一次)。加入1ml生理盐水,剧烈震荡15s,13000rpm 离心5min,弃上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min,取上清4μl 进行PCR 反应。
肺、淋巴结等固体组织:剪取约0.1g 组织,用生理盐水洗去血污,剪碎加入0.5mL TE 转移到匀浆器中匀浆。将匀浆液50μl 转移到1.5mL 离心管中,加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min,取上清4μl 进行PCR 反应。
乳液等液体标本:取标本2-3mL,13000rpm 离心3min,弃上清,沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min,取上清4μl进行PCR 反应。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 PCR 扩增
从试剂盒中取出荧光PCR 反应液(卵形疟原虫-qPCR MIX)、酶混合物(DNA Polymerase MIX),室温融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm 离心10s,向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)5μL,10000rpm 瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
阳性对照(PTC):均产生扩增曲线。
以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明卵形疟原虫核酸阳性。
Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明卵形疟原虫核酸阴性。
如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行卵形疟原虫real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明卵形疟原虫核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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