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TRIzon Reagent
一周
北京百奥莱博科技有限公司
2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")WE0191型TRIzon试剂(总RNA提取)批发,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:WE0191型TRIzon试剂(总RNA提取)批发
编号:WE0191
规格:100ml
英文名:TRIzon Reagent
品牌:百奥莱博
产地:北京
TRIzon是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便,颜色鲜明,便于分层。本试剂适用范围广泛,可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。样品在TRIzon中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入*仿离心后,溶液会分成三层:上层无色水相、中间层和下层红色有机相,RNA分布在上清层中。收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好,无蛋白和DNA污染,可用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等。
自备试剂:*仿、异丙醇、75%乙醇、无RNase的水(新开封或提取RNA专用)。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5M的NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融,否则影响RNA提取得率和质量。
3、本品中含有*酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛,应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
4、样品用TRIzon 匀浆后,如不即刻加入*仿,置于-70℃下可放置一个月以上。
5、保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2~8℃可以保存一周,-20℃条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短,容易降解,建议提取后尽快进行后续实验,如反转录成cDNA,Northern Blot等。
6、若下游实验对DNA非常敏感,建议用不含RNase的DNase I(货号:WE0213A)对RNA进行处理。
操作步骤:
1.各种材料的处理
1a.植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzon中迅速研磨,每30-50 mg组织加入1ml TRIzon,混匀。
注意:样品体积一般不要超过TRIzon体积的10%。
1b.动物组织:取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎,每30-50 mg组织加入1ml的TRIzon,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIzon 1ml混匀。
注意:样品体积一般不要超过TRIzon体积的10%。
1c.单层培养细胞:吸去培养液,可直接在培养板中加入适量TRIzon(每10cm2面积需要1ml TRIzon),用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后,将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中,300×g离心5 min,收集细胞沉淀,仔细吸除所有上清,加入TRIzon 1ml混匀。
注意:
1)收集细胞数量不要超过1×107。
2)TRNzol加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定。如果TRIzon加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染。
3)收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净,否则会导致裂解不完全,造成RNA的产量降低。
1d.细胞悬液:离心收集细胞。每5×106-1×107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml TRIzon。
注意:
1)加入TRIzon前不要洗涤细胞,以免RNA降解。
2)一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪或液氮研磨处理。
1e.血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积TRIzon(推荐0.25ml全血加入0.75mlTRIzon),充分振荡混匀。
1f.可选步骤:对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品,如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎,可以在匀浆处理后4℃,12000rpm(~~13400×g)离心10分钟以除去不溶物质,此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA,而RNA存在于上清中。
2、样品中加入TRIzon后反复吹打几次,使样本充分裂解。室温放置5分钟,使蛋白核酸复合物完全分离。
3、向以上溶液中加入*仿,每使用1ml TRIzon加入0.2ml*仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置2-3分钟。
4、4℃下12000rpm离心15分钟,此时样品分成三层:红色有机相,中间层和上层无色水相,RNA 主要在水相中,把水相(约600μl)转移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇,颠倒混匀,室温放置10分钟。
6、4℃ 12000rpm 离心10分钟,弃上清。
7、加入75%乙醇(用无RNase的水配制)洗涤沉淀。每使用1ml TRIzon用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
8、4℃ 12000rpm离心3分钟,小心吸弃上清,注意不要吸弃RNA沉淀。
注意:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。
9、室温放置2-3分钟,晾干。加入30-100μl无RNase的水,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。
注意:沉淀不要过分干燥,以免难于溶解。
储存条件:2~8℃避光。
更多有关WE0191型TRIzon试剂(总RNA提取)批发的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
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WE0191型TRIzon试剂(总RNA提取)批发关键词:TRIzon试剂(总RNA提取),WE0191,TRIzon Reagent
·抗V5标签单克隆抗体
编号:WE0343
英文名称:Anti V5 Mouse Monoclonal Antibody
规格:100μl
V5标签是从猿病毒5(SV5)副粘病毒P蛋白和V蛋白中分离得到的由14个*基酸残基组成的多肽(GKPIPNPLLGLDST)。该抗体高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的V5标签,不受邻近*基酸组成的影响,可用于检测各种表达载体表达的V5-Tag融合蛋白。
抗体类型:鼠单克隆抗体IgG
免疫原:人工合成多肽
应用范围:WB(1:500-5000)、ELISA(1:1000-10000)
·SDS-PAGE浓缩胶缓冲液(4×)
编号:WE0286
英文名称:SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×)
规格:200ml
本产品为配制SDS-PAGE浓缩胶缓冲液,可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶,方便、快捷。产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。
操作步骤:
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度,最佳胶浓度请参考附表1。
I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
注:加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触,是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可), 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层,使凝胶表面保持平整。
5、静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×)浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入10%过硫*(代"酸")铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
6、静置10~20分钟,等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。
附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围
SDS-PAGE 分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6%胶 | 50-150 kD |
8%胶 | 30-90 kD |
10%胶 | 20-80 kD |
12%胶 | 12-60 kD |
15%胶 | 10-40 kD |
分离胶浓度 | 凝胶体积 | 所需各组分体积(单位:ml) | ||||
纯水 | 30%Acr-Bis(29:1) | 分离胶缓冲液(4×) | 10%APS | TEMED | ||
6% | 5ml | 2.75 | 1.0 | 1.25 | 0.05 | 0.004 |
10ml | 5.5 | 2.0 | 2.5 | 0.1 | 0.008 | |
15ml | 8.25 | 3.0 | 3.75 | 0.15 | 0.012 | |
20ml | 11 | 4.0 | 5 | 0.2 | 0.016 | |
8% | 5ml | 2.42 | 1.33 | 1.25 | 0.05 | 0.003 |
10ml | 4.8 | 2.7 | 2.5 | 0.1 | 0.006 | |
15ml | 7.25 | 4.0 | 3.75 | 0.15 | 0.009 | |
20ml | 9.7 | 5.3 | 5 | 0.2 | 0.012 | |
10% | 5ml | 2.08 | 1.67 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
10ml | 4.17 | 3.33 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
15ml | 6.25 | 5.0 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
20ml | 8.3 | 6.7 | 5 | 0.2 | 0.008 | |
12% | 5ml | 1.75 | 2.0 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
10ml | 3.5 | 4.0 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
15ml | 5.25 | 6.0 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
20ml | 7.0 | 8.0 | 5 | 0.2 | 0.008 | |
15% | 5ml | 1.25 | 2.5 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
10ml | 2.5 | 5.0 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
15ml | 3.75 | 7.5 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
20ml | 5 | 10.0 | 5 | 0.2 | 0.008 |
凝胶体积 | 所需各组分体积(单位:ml) | ||||
纯水 | 30%Acr-Bis(29:1) | 浓缩胶缓冲液(4×) | 10%APS | TEMED | |
2ml | 1.14 | 0.34 | 0.5 | 0.02 | 0.002 |
4ml | 2.28 | 0.68 | 1 | 0.04 | 0.004 |
6ml | 3.42 | 1.02 | 1.5 | 0.06 | 0.006 |
8ml | 4.56 | 1.36 | 2 | 0.08 | 0.008 |
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