生物素厂商

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

生物素厂商是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多生物素等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：生物素厂商
编号：BTN131092
规格：1g
英文名：Biotin
品牌：百奥莱博
产地：北京
生物素为B族维生素之一，又称维生素H、维生素B7、辅酶R，CAS号为58-85-5，分子式为C₁₀H₁₅N₂O₃S，分子量为243.3。游离的生物素常被用于从亲和素柱子纯化生物素化复合物的洗脱缓冲液中。其在用HABA染料测量生物素化程度的过程中可以被用来作为参考标准。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

欲咨询购买生物素厂商，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·包涵体中量纯化试剂盒
编号：BTN90509
英文名称：Inclusion Body Midiprep Kit
规格：5次
本产品是我们公司包涵体微量纯化试剂盒(BTN90508)的中量提取升级产品，用于中量，快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1．中量提取，一次可以处理30-50mL的菌液，一次中量提取相当于10-20次微量提取。
2．操作简单快速，整个过程只要四十分钟左右。
3．大规模提取，可以在15-50mL离心管中完成。
4．能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白所占比重达到60%以上。
5．细胞裂解通过非离子洗涤剂的化学裂解法，裂解更加温和。
6．得到的包涵体可以用于重折叠。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	250ml
包涵体溶解液	25mL
溶菌酶	3g
Benzonase(1U/μL)	125μl
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，但溶菌酶和Benzonase需要低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

准备工作：
将3g溶菌酶全部加入到25mL溶液A中溶解，然后根据每次的需要量(一次大量提取需要5mL)分成1mL/只放-20℃待用。每次只取用一管含溶菌酶的溶液A。
包涵体中的重组蛋白一般比溶解状态中的蛋白质更能够抵抗微量内源性蛋白水解酶的降解，如果实验发现得到的重组蛋白确有降解，则需要在溶液A中新鲜加入自备的蛋白酶抑制剂混合物(BTN80808)。

一、细胞裂解和包涵体的纯化：
1．在蛋白诱导期结束时，转移30mL菌液到一个干净的塑料离心管中。
2．5000-7,000rpm室温离心3分钟，小心弃上清。
3．加入5mL含溶菌酶的溶液A重悬细胞。
4．室温放置10-20分钟裂解细菌，其间可以用手轻弹离心管混匀。
5．-20℃冷冻至凝固。凝固有利于裂解细菌，所以一定要凝固到细菌溶液变成固体。
6．室温水浴解冻。如果裂解充分，细菌释放出的DNA将使裂解物十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要重复3-6步，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。如有条件最好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
7．加入25μL的Benzonase(1U/μL)，脱色摇床上摇晃直到裂解液不再粘稠，一般需要30分钟左右(检查方式是将裂解物倾倒转移到另一离心管中，在转移过程中看其是否粘稠)。
8．5000-7,000rpm 4℃离心5分钟，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重组蛋白，可以保留作为SDS-PAGE对照样品。
9．将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在25mL的溶液B中，轻柔混匀后室温放置5分钟。
10．5000-7,000rpm 4℃离心10分钟，小心收集上清,可以作为包涵体第一次洗涤的对照样品。
11．将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在25mL的溶液B中，轻柔混匀后室温放置5分钟。
12．5000-7,000rpm 4℃离心10分钟，小心收集上清作为包涵体第二次洗涤的对照样品。一般洗涤两次就能够得到足够纯净的包涵体，如果需要更多洗涤，需要用户单独购买包涵体洗涤液(溶液B)。
13．得到的沉淀即为包涵体，可以长期放置在冰箱待用或直接进入包涵体的溶解步骤。

二、包涵体的溶解：
1．在包涵体沉淀中加入5mL包涵体溶解液，用枪头充分吹打后漩涡震荡。如果低温放置，包涵体溶解液会产生沉淀，必须45-65℃溶化并混匀后才能使用。
2．室温放置1小时使蛋白质充分溶解。
3．20000g 4℃离心20分钟，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：检查离心管能否承受此离心力。SDS-PAGE检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
4．得到的蛋白质溶液可以用于复性等试验。由于不同的蛋白质有不同的最佳复性条件，所以本公司不能提供统一的复性溶液，需要用户自己摸索。
 注意：包涵体纯化过程中引入了溶菌酶、DNase和RNase等外源蛋白质，在SDS-PAGE分析时可能有额外条带出现。


生物素厂商关键词：生物素,58-85-5,Biotin

SV1391 RNase 污染检测试剂盒
YT200 生物素标记AP2凝胶迁移探针(0.2μM) Biotin-labeled AP2 Probe For EMSA
KFS282 U0126(MEK1/2抑制剂) U0126
SY0520 丙*(代"酮")酸*溶液(100 mM) Sodium Pyruvate 100 mM Solution
SV0561 NruI限制性内切酶 NruI Restriction Endonuclease
WE0189 高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法) CWhipro Circulating Nucleic Acid Midi Extraction Kit
HR0467 Cycloheximide  Cycloheximide
SY0160 RAR-GFP报告基因质粒 RAR GFP Reporter Plasmid
RFT006 250bp DNA ladder(250～5000bp)
KFS134 尼氏小体染色液 Nissl body Staining Solution
ALH144 植物基因组DNA快速提取试剂盒(CTAB法) Plant genomic DNA Extraction Kit(CTAB)
YT465 C端DsRed标签融合蛋白质粒(红色荧光蛋白) C-DsRed plasmid（with CMV promoter）
BTN81226 Tricine-SDS PAGE阴极电泳液(干粉) Tricine SDS-PAGE Anode Buffer
BTN71206 柱式动物DNA提取试剂盒 Animal DNA column extraction kit
SV1128 T7 核酸内切酶 I T7 nucleic acid enzyme I
YT097 抗荧光淬灭封片液 Antifade Mounting Medium
BTN120653B 填入法DNA末端标记试剂盒(生物素标记dUTP) Fill-in DNA End Labeling Kit
SY0418 DEAE弱阴离子高速交换树脂 DEAE Agarose Resin 6FF
生物素厂商关键词：生物素,58-85-5,Biotin


·酿酒酵母Y187感受态细胞
编号：BTN140389
英文名称：E.coli Y187 Rosetta Competent Cell
规格：10×100μL
 Y187菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母单杂，双杂实验用菌株，MATα型，可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株(Y2HGold，AH109等)通过mating 操作进行筛库试验。Transformation marker 为: trp1，leu2，报告基因为：lacZ，MEL1。Y187-GAL4 酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端1～ 174 位*基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒PGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C 端768～881 位*基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4 系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N 端1～174 位*基酸区段的DNA 结合域(DNA-BD)和位于C端768～881 位*基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD 单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD 不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD 融合，形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果 bait和prey发生相互作用，就会促使 BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。Y187 有两个报告基因：lacZ，MEL1，分别由两种不同的启动子(G1，M1)启动，这两种启动子只有GAL4 识别的17bp 核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。

 Y187感受态细胞是实验室常用酵母双杂用菌株，本产品经特殊工艺制作而成，经PGADT7质粒检测转化效率为104 cfu/μg DNA。

菌株基因型：MATα，ura3-52，his3-200，ade 2-101，trp 1-901，leu 2-3，112，gal4Δ，met–,gal80Δ，URA3: :GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ，MEL1

产品组成：

成分	规格
Y187感受态细胞	0.1ml×10支
PGADT7(control vector)，10 ng/μL	10μl
Carrier DNA，5μg/μL	100μl
PEG/LiAc	5ml
说明书	1份

储存条件：感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/liAC、PGADT7质粒4℃保存；有效期半年。

自备试剂：目的DNA、YPDA、SD培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中依次加入预冷的目的质粒2-5μg，CarrierDNA(95-100℃ 5分钟，快速冰浴，重复一次)10μL，PEG/LiAc 500μL，吹打混匀，30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6-8次混匀)。
3. 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6-8次混匀)。
4. 5000rpm离心 40秒，弃上清。取400μL ddH2O 重悬沉淀，5000rpm离心 30秒，弃上清。
5. 取 50μL ddH2O 重悬沉淀，涂板，29℃培养48-96小时。

注意事项：
1. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA 平板29℃，48h培养可见直径1mm 克隆；涂SD 单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 三缺或四缺平板29℃，80-90h培养可见直径1mm 克隆。
2.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。

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