柱式土壤DNA提取试剂盒特价优惠

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应柱式土壤DNA提取试剂盒特价优惠，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：柱式土壤DNA提取试剂盒特价优惠
编号：BTN71205
规格：50次
英文名：Soil DNA column extraction kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
本试剂盒专门用于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的DNA的试剂。

试剂盒特点：
1. 去污染效果更好，得到的DNA可以直接作为PCR模板或酶切，不需要再进行去腐殖酸处理。
2. 操作过程更加简单快速，整个操作只需要10多分钟，扩容性好。
3.产量高，每克土壤一般可以提取到5-50μg DNA，片段长度在20-50 Kb，OD260/280一般都在1.8以上。
4.适合于各种土壤(包括河海沉积物)。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	40ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，保存期为一年。

使用方法：
1. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后充分混匀，取0.5mL加入到1.5mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2. 称取0.1-0.3 g的土壤，加入到含预热溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10分钟。如果是扩量操作，可以使用更多土壤和较大离心管。也可以将同一种土壤在较大离心管中震荡处理，然后再分到1.5mL离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的土壤震荡起来。
3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4. 12000～15000g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，实际颜色取决于腐殖酸的含量，上清液的体积一般为300-400μl)。
5.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6. 将离心管冰浴至少5分钟。
7. 12000～15000g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL离心管中，上清液颜色将比第4步得到的上清的颜色稍淡，体积在0.7mL左右。
 注意：下面第8-第9步的*仿抽提操作可以省略，直接进入第10步，但DNA的产量会低50%左右，OD260/280在1.7-1.8。如果直接进入第10步，则转移的溶液体积不要超过0.6mL，否则没有空间加溶液C。
8. 加入0.2mL的*仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9. 12000～15000g室温离心3分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。上清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。将上清转移到新的1.5mL离心管时，不要超过0.6mL，否则没有空间加溶液C。如果有多余的可以弃之不用。
10. 加入1.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀。
11. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液)。
12. 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
13. 如果有必要，可以再加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的DNA的纯度稍有提高，但产量稍微有所降低。
14. 12000～15000g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
15. 将离心吸附柱转移到一新的1.5mL塑料离心管中，加入50-100μL DNA洗脱液2.0。
16.室温放置离心吸附柱1-2分钟。
17. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。

疑难解答：
Q: 如何判断提取的DNA没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测最大光吸收。注意：有腐植酸污Q: 如何判断提取的ＤＮＡ没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测最大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示 DNA 不能使用，有的腐殖酸并不抑制 PCR扩增。
Q: 腐殖酸的最大吸收波长是多少？
A：腐植酸(humic acid)是一大类呈棕黑色或黑色的物质，其结构千差万别，土壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其最大吸收波长也各不相同，有的土壤的腐殖酸在 260nm 有最大吸收(见 Appl.Environ. Microbiol.，63：4993，1997)，有的则在 340nm。所以用特定的波长测定 OD 值时波长的选定要根据土壤而决定。Sigma，Fluke等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简单，其最大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。
Q:是否腐植酸都会抑制后续的DNA反应？
A：否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对后续反应有影响最好通过实验来验证。如果用提取的DNA溶液原液进行反应而反应没发生，而对照样品(已知的不含污染的DNA)能够发生，说明可能抑制作用。
Q：如果得到的DNA样品还是含有抑制后续反应的腐植酸，如何去除？
A：如果提取的DNA原液不能扩增，可以将样品稀释10倍和100倍再进行 PCR，抑制作用一般可以解除。如果仍然抑制，可以使用我公司的PCR Inhibitor Scavenger(BTN60804)。如果仍然不能解除，则可以通过柱式腐殖酸清除剂(BTN60801)或先电泳，再用超大片段胶回收试剂 Magic Gel DNArc(BTN60706)纯化土壤 DNA，去除残留抑制剂。其中后两方法最有效，得到的原液一般可以直接扩增。
Q：在用土壤 DNA进行细菌专一性 PCR时，为何没加 DNA 模版的阴性对照有扩增产物出现？
A：这是由于使用的Taq DNA聚合酶一般从E.coli表达菌株中提取，提取过程中污染了E.coli的基因组 DNA，而使用的广谱细菌专一性引物可以识别所有细菌DNA基因组DNA模版，所以会产生扩增。建议使用高质量的Taq DNA聚合酶。

更多有关柱式土壤DNA提取试剂盒特价优惠的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·病毒沉淀剂
编号：BTN110810
英文名称：Virus Precipitation Reagent
规格：100mL
生物医学实验中，常常需要从液体样品(如血浆，培养基)中纯化病毒，但由于病毒颗粒十分细小，传统的分离方法是使用长时间超速离心才能将其从液体样品中分离出来，此操作非常繁琐，并且病毒在此过程中容易变性。为了克服传统方法的缺点，本公司开发了本产品。

产品特点：
1. 能浓缩病毒100倍以上，适合各种病毒。
2. 比超速离心法、密度梯度离心分离法和过滤法更温和，回收率更高，并且大部分病毒能保持活性，适合各种后续实验，包括转染实验和核酸纯化。
3. 比超速离心法和密度梯度离心分离法简单，不需要大型离心机等设备。
4.适合水样、细胞培养基上清和其他不含细胞的样品。本产品100mL可以处理400mL含病毒的溶液，可以将病毒浓缩100倍以上。
5. 已经成功用于coronaviruses 、rhabdoviruses 、parainfluenzaviruses 、respiratory syncytial virus、rubella virus、picornaviruses等病毒。
6. 对环境水样，请不要使用本产品，而是使用水体病毒沉淀剂。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂：PBS缓冲液或TES缓冲液(用于重悬病毒)

使用方法：
注意：需要尽量减少含病毒溶液中蛋白的浓度。收集培养细胞分泌的病毒前，最好换上不含血清蛋白和其他蛋白成分的培养基。
1. 将培养细胞刮下，和培养基一起全部转移到干净的离心管中，10000rpm 4℃离心20分钟。转移上清(含病毒)到新离心管中。如果培养细胞内还有病毒颗粒，并且病毒颗粒可以抵抗冻融，则可以把细胞冻融数次，释放出包浆的病毒，然后再转移到干净的离心管中，10000rpm 4℃离心20分钟。转移上清(含病毒)到新离心管中。如果病毒溶液不含细胞成分，则直接进入下一步。
2.在含病毒的上清中加入1/4 总体积的本产品(4mL 病毒溶液则加1mL 本产品)，4℃冰箱中放置过夜或12小时以上。病毒在此期间将形成沉淀。
3. 10000rpm 4℃离心20分钟收集病毒沉淀，尽可能弃掉所有上清(可以暂时保留上清，等确认病毒浓缩成功后再丢弃)。
4. 将离心管放回离心机短暂离心数秒，再次小心去除残留上清。
5. 将沉淀(病毒颗粒)溶于适量预冷的自备的缓冲液(如PBS缓冲液、TES缓冲液和培养基中，取决于后续实验)，立即使用或者-20℃长期保存。


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BTN70503C DNA marker(200-1500bp) DNA ladder(200-1500bp)
YT026 TG1甘油菌 E.coli TG1
SV0987 rNTP 套装
HR0063 真菌蛋白提取试剂盒 Fungal protein extraction kit
BTN131074 SDS-PAGE样品预处理试剂盒 Sample Preparation Kit for SDS-PAGE
YT378 2×PCR Master Mix（含Taq酶，buffer，dNTP） 2×PCR Master Mix
SV1637 SNAP-Cell Fluorescein
KFS064 WB抗体清除液(强碱性)
BTN131292 PFG固定液 PFG Fixative Solution
SY0088 CREB-Luc报告基因质粒 CREB luciferase reporter plasmid
HR0354 丽春红染色液 Ponceau S Solution
WE0117 BalbMulti多重PCR Mix BalbMulti PCR Mix
SV0349 EcoRI-HF限制性内切酶 EcoRI-HF Restriction Endonuclease
SY0450 髓鞘蛋白脂质蛋白多肽PLP(139-151) Myelin Proteolipid Protein (PLP) 139-151
BTN131139 Deaza dGTP溶液(5mM) Deaza dGTP Solution
YT126 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(WST-1法) WST-1 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
SV1186 pBR322 载体
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·大肠杆菌Rosetta(DE3)化学感受态细胞
编号：BTN121004
英文名称：E.coli Rosetta(DE3) Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达107。本感受态细胞适用于真核蛋白表达，具有*霉素抗性。

菌株基因型：F-ompT hsdSB(rB- mB-)gal dcm lacY1(DE3)pRARE(argU，argW,ileX，glyT，leuW，proL)(CmR)

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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