Benzonase核酸酶北京现货促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")Benzonase核酸酶北京现货促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：Benzonase核酸酶北京现货促销
编号：BTN101001
规格：500U
英文名：Benzonase Nuclease
品牌：百奥莱博
产地：北京
Benzonase是由粘质沙雷氏菌分泌的、由两个大小为26 kD的亚基组成的一种广谱核酸酶，由Benzon公司最先商品化，故名Benzonase。其活力比DNase I 强34倍，能以相同的效率酶切单联和双链DNA和RNA，将其消化成3-5 碱基长度(杂交限度以下)的5´-单磷酸寡核苷酸。其活性需要Mg2+，最佳pH在6-10 之间，最适温度在35-44℃。本产品是在野生型的Benzonase的基础上经过基因工程改进而得。

产品特点：
1．微量本产品就能高效降解所有形式(包括单链，双链，线性和环状)的DNA和RNA，尤其适合从细胞裂解物中去除核酸，降低样品粘度而不影响蛋白电泳图谱。
2．在有变性剂存在的条件下(如4M 尿素)还有活性，可以直接加入很多蛋白裂解液中。
3．降解核酸完全，符合FDA 关于核酸污染的处理规程，可以用于工业生产。
4．可以用于蛋白提取、2D凝胶电泳、Western Blot、免疫沉淀等实验。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期两年。

活性定义：在标准反应体系内30分钟内使OD260改变1.0的酶量，相当于彻底降解37μg DNA的酶量。

使用方法：

一、酶的稀释
本产品浓度为1U/μL，如果需要稀释Benzonase，需要自备酶稀释液，稀释液的配方是：50mM Tris-HCl pH8.0，20mM NaCl，2mM MgCl2。
在稀释液中的Benzonase 只能在4℃放置数天。

二、用于去除核酸的标准试验(用户可以以此为参考设计自己的实验)将500ng鲑鱼精DNA 溶解在50mM Tris-HCl pH8.0，1mM MgCl2，0.1mg/mL BSA中，然后加入90U的Benzonase，37℃保温4小时，只剩下0.2ng可以杂交检测的DNA，如果23℃保温4小时，只剩下0.5 ng可以杂交检测的DNA。如果0℃保温4小时，只剩下1ng可以杂交检测的DNA。

三、用于降低E.coli 裂解液的粘度的标准试验(用户可以以此为参考设计自己的实验)
将7.5 g E.coli 悬浮于15mL悬浮液(10mM Tris-HCl pH9.0，1mMEDTA，6mM MgCl2)中，加入适量的本产品，然后将悬浮液经过弗氏压碎器破碎后迅速置于0℃冰上。

客户可以根据下表自行选择加入本产品的量

 

本产品在裂解液中的浓度	得到不粘稠裂解液所需孵育时间 (不粘稠是以得到可滴落的E.coli裂解液为标准)
0.24U/mL	＞60min
2.4U/mL	15min
8U/mL	5min
24.0U/mL	1.25min

答客问：
Q：什么情况下应该使用Benzonase核酸酶？
A：Benzonase核酸酶的应用领域包括：降低样品粘度以利操作(例如重组蛋白纯化，哺乳动物细胞裂解特下游要求粘度较低等情况)：减少存放的外周血单核细胞(PBMC)的结块现象，蛋白复性前高质量包涵体的制备，去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响。
Q：怎样灭活Benzonase核酸酶？如何去除？
A：采用EDTA螯合金属离子会可逆地抑制Benzonase活性，极端条件会造成不可逆失活，例如100mM NaOH，70℃处理30分钟等，Benzonase可以用色谱法从目的产物中分离出去，由于这种核酸内切酶极其稳定，建议在终产物中要求不含有核酸酶的应用中不要使用Benzonase。
Q：我的Benzonase核酸酶遗忘在桌上了，还能用吗？
A：根据破坏性稳定性测试，Benzonase 核酸酶非常稳定，即使在37℃下孵育数月仍能保持>90%的活性。
Q：我需要使用别的缓冲液，哪些条件是Benzonase 核酸酶必需的？哪些条件会降低它的活性？
A：Benzonase核酸酶的活性需要1-2mM Mg2+，而在单价阳离子浓度>50%，磷酸浓度>20mM，硫*(代"酸")铵浓度>25mM等情况下，Benzonase的活性会降低50%
Q：Benzonase核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物兼容吗？
A：可以兼容，但是对于含有EDTA 配方的蛋白酶抑制剂混合物要特别小心，EDTA浓度大于1mM时会抑制Benzonase的活性。
Q：我的目的蛋白不溶，需要进行变性条件纯化，Benzonase 核酸酶能在尿素环境消化核酸吗？
A：实际上Benzonase核酸酶在有尿素(浓度可达6M)的情况下会增加活性，在尿素浓度为6M时活性先增加，随着时间处长活性又有降低。
尿素7M时，Benzonase核酸酶15分钟后出现变性并失活。但是在酶失活前多数核酸已经降解了。如果Benzonase 核酸酶的原浓度较高时会部分补偿7M 尿素的影响。

关于Benzonase核酸酶北京现货促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·包涵体大量纯化试剂盒
编号：BTN90510
英文名称：Inclusion Body Maxiprep Kit
规格：2次
本产品是包涵体微量纯化试剂盒的大提升级产品，用于大量，快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1.大量提取，1次可处理多达5升的菌液，相当于50次中量提取。
2.适合制备级别的包涵体纯化，需在50mL以上的离心管或离心瓶中完成。
3. 能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白在包涵体中所占比重达到60%以上。
4. 即可以选择高压裂解法，也可以采用酶学裂解法裂解细菌。
5. 得到的包涵体可以用于重折叠，也可以用于凝胶层析和动物免疫。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	100mL
溶液B	250mL×2
包涵体溶解液	100ml
溶菌酶	100mg
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存(溶菌酶需要-20℃保存，包涵体溶解液可以室温保存)，有效期一年。

自备试剂：如果得到的重组蛋白确有降解则需要自备蛋白酶抑制剂混合物(BTN80808)。

使用方法：

一．细胞沉淀：
1．转移1-5升菌液到干净的、预称重量的塑料离心瓶中。如果离心瓶体积不够大，可以分多次反复离心收集。
2．5000g(相当于Sorvall GSA转头5500rpm)4℃离心15-30分钟，小心弃上清。
3．复称重量，差值就是细菌的湿重。1升的过夜培养的大肠杆菌湿重一般为3克，所以1-5升菌液一般能得到3-15克细菌。注意：后续操作的很多溶液都是按此步得到得细胞湿重添加。
4．细胞沉淀可以立即使用或存放在-80℃待用。

二．细胞裂解(下面两法中选其一)：
 高压破碎法(French Press)+超声法(推荐方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌或用Waring捣碎机匀浆(如果细菌湿重超过10克)使细菌悬浮，直到检测不到成块的细胞为止。如有必要，可以加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL。
2．让细胞通过压力为16000-18000 lb/in2的高压细胞破碎仪，收集的细胞裂解液需放冰上。
3．重复上步操作一次或多次，直到绝大部分细菌都被裂解。注意：每次处理后最好在显微镜下检查细菌裂解的比例。
4．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中最好将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。
 酶法+超声法(在没有高压破碎仪器时首选方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL的含溶菌酶的溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌细菌沉淀使之悬浮。
2．在细菌悬浮液中加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL，搅拌混匀后37℃放置30分钟裂解细菌，其间不时需要用玻璃棒混匀。细菌释放出的DNA将使裂解物变得十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要继续裂解，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。由于处理量大，最好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
3．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中最好将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。

三．包涵体纯化：
1．将超声处理的细胞裂解液转移到离心瓶中，22000g 4℃下高速离心60分钟(注意：转子不同其对应的离心速度不同)，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重组蛋白，可以保留作为SDS-PAGE对照样品。
2. 将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在预冷的溶液B中。每克细菌需要5mL溶液B，1升细菌的湿重约3克，大约需要15mL溶液B，用玻璃棒或匀浆器搅拌混匀后室温放置5分钟。
3．22000g 4℃下高速离心30分钟，沉淀将出现三层，最下面的是未彻底破裂的细胞碎片，其上是包涵体，最上层的松软沉淀是细胞壁和细胞外膜。如果处理过程中使用过溶菌酶，则此层较薄。小心收集上清，可以作为包涵体第一次洗涤的对照样品。
4．重复第8-第9步直到上清变清和最上层细胞壁和细胞外膜松软沉淀消失，此过程一般需要重复洗涤2次(共3次洗涤)，小心收集上清作为包涵体第二次洗涤和第三次洗涤的对照样品。本试剂盒提供的溶液B足够一次5升规模的提取洗3次，如需更多溶液B请单独购买。
5．上步得到的沉淀即为包涵体，其中重组蛋白一般占60%重量，其余40%为其他蛋白质。此沉淀可以长期放置在-80℃冰箱待用，也可以直接用于免疫动物制备抗体，还可以直接进入下面得包涵体的溶解步骤。
6．估计重组蛋白的产率：首先需要通过预实验知道重组蛋白的表达水品，如果表达水平为1%，则1克湿重的细菌中将含有1mg重组蛋白质。此法得到的重组蛋白质的回收率一般在75%，即1mg重组蛋白质能得到0.75mg，丢失0.25mg。

四．包涵体的溶解：
1．在室温下，将包涵体溶解液加入到包涵体沉淀中，用枪头充分吹打后漩涡震荡。如果需要将溶解的包涵体直接用于凝胶过滤层析进一步纯化，则按每克原始细胞湿重加入1mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为4-5mg/mL；如果需要将溶解的包涵体直接用于蛋白质折叠，则按每克原始细胞湿重加入3mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为1-2mg/mL；注意：包涵体溶解液低温放置会产生沉淀，必须45-65℃溶化并混匀后才能使用。
2．室温放置1小时使蛋白质充分溶解。
3．100,000g 4℃离心60分钟(转速需要根据离心机转子的大小换算)，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：检查离心管能否承受此离心力。SDS-PAGE检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
4．将上清(溶解的包涵体)分成10-20mL一份，放于塑料离心管中(不要超过离心管容量的70%)置-80℃长期保存或直接用于复性等试验。由于不同的蛋白质有不同的最佳复性条件，需要用户自己摸索。包涵体纯化过程中引入了溶菌酶，在SDS-PAGE分析时可能有额外条带出现。


Benzonase核酸酶北京现货促销关键词：Benzonase核酸酶,BTN101001,Benzonase Nuclease

YT623 30% Acr-Bis (29:1) acrylamide-bisacrylamide (29:1)
SY0488 JC-1荧光探针
KFS248 Rnase A(10mg/ml) Ribonuclease A
RFT171 GST标签抗体 Mouse anti-GST Monoclonal antibody
SY0275 X-Gal
BTN70903 一步法质粒DNA提取试剂盒2.0 One-step plasmid DNA extraction kit 2.0
WE0304 蛋白印迹膜再生液 Stripping Buffer
SV0855 Q5 超保真 2X Master Mix
ALH199 20×Sybr Green I(荧光定量PCR级) 20×Sybr Green I(qPCR Grade)
BTN120693 丝裂霉素C溶液 Mitomycin Solution
YT315 脂质氧化水平检测试剂盒(MDA试剂盒)(丙二醛检测盒) Lipid Peroxidation MDA Assay Kit
SV1568 *调素依赖型蛋白激酶 II（CaMK II）
KFS004 柠檬酸*-EDTA抗原修复液(40X)
BTN120412 微球菌核酸酶 Micrococcal Nuclease
SY0027 改进型DNA聚合酶 Taq Plus DNA Polymerase
HR0239 细胞核提取试剂盒 Nuclear extraction kit
KFS349 过氧化*(H2O2)测试盒
SV0190 BsmAI限制性内切酶 BsmAI Restriction Endonuclease
SY0387 透明质酸酶 Hyaluronidase
BTN90503 电泳级甘油 Glycerol
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BTN100805A 水饱和酚-*仿-异戊醇混合液(RNA提取用) Phenol-Chloroform-Isoamylol
BTN131049 十二烷基磺酸* SDS
YT425 DNA Ladder(200bp-12kb)(12条带)(DNA分子量标准) DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands)
ALH033 通用型植物RNA提取试剂盒(Dnase I) Universal Plant RNA Extraction Kit
KFS107 糖元染液
BTN100883 5M异硫*酸胍溶液(RNase-free)
SY0131 LXRE-Luc报告基因质粒 LXRE Luciferase Reporter Plasmid
HR0430 Caspase 8 活性检测试剂盒 Caspase 8 activity assay kit
WE0160 超纯dNTP混合液(10 mM) UltraPure dNTP Mix(10 mM each)
SV0474 MluI限制性内切酶 MluI Restriction Endonuclease
SY0493 罗丹明123 Rhodamine 123
KFS253 Hoechst 33342/PI双染试剂盒 Apoptotic Cell Hoechst 33342/PI Detection Kit
YT169 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒 Senescence β-Galactosidase Staining Kit
SV1339 SP6 RNA 聚合酶
BTN51203 非酶RNA清除剂1.0 Non-enzymatic RNA scavenger 1.0
BTN130848C 即用型LB平板培养基(含Kan) LB Petri Dish(Kan)
YT582 N-*甲酰基-D-*基酸酰胺水解酶 N-Carbamoyl-D-Amino-Acid Hydrolase (Crude Enzyme)
ALH379 新型蛋白染色试剂盒(替代考马斯亮蓝染色) Novel protein staining kit
BTN120695 新生霉素溶液 Novobiocin Sodium Solution
RFT085 Western二抗稀释液 Secondary Antibody Dilution Buffer
SY0235 腔肠素h Coelenterazine h
KFS009 免疫染色封闭液 Immunol Staining Blocking Buffer

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