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Instant Blue-White Vector T,Type A
长期
北京百奥莱博科技有限公司
低温运输,-20℃保存,有效期两年。使用方法:一. PCR产物的纯化和定量1. 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分离。最好不要使用TBE缓冲液,因为它会影响DNA的胶回收效率。2.在长波(360nm)紫外灯下快速切胶,尽可能切掉多余的凝胶。为避免嘧啶二聚体的形成,可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)。3. 用百奥莱博的柱式DNArc(BTN60202)纯化回收PCR片段。溶解PCR片段的超纯水体积越小越便于后续操作。4. 将回收的片段与浓度已知的DNA Marker在含EB(BTN3180)或绿如蓝染料(BTN70303)的琼脂糖凝胶中电泳,通过比较DNA条带的荧光强度而估测PCR纯化产物的浓度。注意:一般不推荐使用测OD260的方法,因为回收的DNA很珍贵,该方法需要比较多的DNA。5. 如果所得的DNA片段浓度较低,可以使用本公司核酸浓缩剂(BTN110801)将其浓缩到需要的浓度。6. 如果PCR片段为平末端,则需要用加A试剂盒处理,否则不能用于与T载体的连接反应。二. 连接反应1. 短暂离心装有T载体的离心管。2.在两个离心管中加入下列成分:<table width=550 border=1 style="border-collapse:collapse;text-align:center;border:black;"><tr style="text-align:center;font-weight:bold;border-bottom:3px solid;background-color:#D7D1F8;"><td>成分<td>样品管<td>负对照<td>正对照<tr><td>自备T4 Ligase Buffer,10×<td>1μl<td>1μl<td>1μl<tr><td>蓝白T载体(40 ng/uL)<td>1μl<td>1μl<td>1μl<tr><td>自备PCR纯化产物<td>见下注<td>不加<td>不加<tr><td>阳性对照(40ng/uL)<td>不加<td>不加<td>1μl<tr><td>自备T4 Ligase(5-10U/μL)<td>1μl<td>1μl<td>1μl<tr><td>补超纯水到<td>10μl<td>10μl<td>10μl</table>注:PCR纯化产物与蓝白T载体的摩尔比最好为3-10,可以按下面的公式计算出连接反应中需要的PCR纯化产物的ng数:<img src="http://www.bjbalb.com/pic3/BTN60603.jpg" alt="连接反应中需要的PCR纯化产物ng数的计算公式">假如插入片段和载体的连接比例设定为3,连接反应中加入蓝白T载体(长度为3Kb)的量为40ng,则需要长度为0.5Kb的PCR纯化产物的量是:<img src="http://www.bjbalb.com/pic3/BTN60603-2.jpg" alt="需要长度为0.5Kb的PCR纯化产物的量是">3. 用移液器吹打连接反应使之混匀后,16℃孵育12小时(或按T4 Ligase供货商提供的说明书进行连接)。三. 细菌转化1. 将100μL感受态细胞于冰上解冻。注意:最好使用转化效率在1×108cfu/μg DNA以上的感受态细胞进行转化,因为采用单碱基突出端进行连接不是很有效。2. 取5μL连接产物加入到感受态细胞中,轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。3. 将管放入预加温到42℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货即用型蓝白T载体A型(T7-SP6,有MCS)供应,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货即用型蓝白T载体A型(T7-SP6,有MCS)供应
编号:BTN60603
规格:20次
英文名:Instant Blue-White Vector T,Type A
品牌:百奥莱博
产地:北京
本产品是用Xcm I酶切环状的可保种型蓝白T载体(BTN60803)去掉一段1.3Kb的插入片段后得到的线性DNA片段(载体部分),其两个末端的5´都有一个突出的T,可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。
产品特点:
1. 由于是通过Xcm I酶切制备,所以载体两端的带T率为100%,远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上,缩短了筛选过程。
3. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I),便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
4. 克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子,便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内,可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1 复制起始子,可以制备单链DNA。
产品组成:
成分 | 规格 |
即用型蓝白T载体(40ng/uL) | 20μl |
阳性对照(40ng/uL) | 5μl |
说明书 | 1份 |
成分 | 样品管 | 负对照 | 正对照 |
自备T4 Ligase Buffer,10× | 1μl | 1μl | 1μl |
蓝白T载体(40 ng/uL) | 1μl | 1μl | 1μl |
自备PCR纯化产物 | 见下注 | 不加 | 不加 |
阳性对照(40ng/uL) | 不加 | 不加 | 1μl |
自备T4 Ligase(5-10U/μL) | 1μl | 1μl | 1μl |
补超纯水到 | 10μl | 10μl | 10μl |
我公司生产供应销*(代"售")的克隆与表达产品正全系列现货促销,满分期待您的垂询选购北京现货即用型蓝白T载体A型(T7-SP6,有MCS)供应。
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