核酸内切酶IV 工具酶

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百奥莱博专业生产供应核酸内切酶IV 工具酶，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：核酸内切酶IV 工具酶
编号：BTN130638
规格：1000U
英文名：Endonuclease IV
品牌：百奥莱博
产地：北京
核酸内切酶IV能够作用于DNA分子上的几种氧化性损伤。该酶是一个脱嘌呤/脱嘧啶(AP)核酸内切酶，水解DNA上的完整AP位点，占E.coli AP酶总活性的10%。切割AP位点5´端的第一个磷酸二酯键，产生3´羟基和5´脱氧核糖磷酸末端。该酶也具有3´二酯酶活性，能从DNA的3´末端释放磷酸甘油醛、完整的脱氧核糖 5´-磷酸和磷酸。其反应原理图如下：


产品用途：
➤ 单细胞凝胶电泳(彗星试验)，彗星试验的推荐稀释倍数1:10⁴～1:10⁵；
➤ 碱洗脱；
➤ 碱解旋。

产品组成：

 

成分	规格
Endonuclease IV	100μL
10×Buffer	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

热失活：85℃，20分钟。

活性定义：1单位指在 10μl缓冲液体系中，37℃条件下，1小时内能够切割 1pmol含一个AP位点的34bp寡核苷酸双链所需要的酶量。

AP位点的创建方法如下：37℃条件下，用1单位尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)处理 10pmol含单一尿嘧啶碱基的34bp寡核苷酸双链2分钟。

更多有关核酸内切酶IV 工具酶的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·柱式酵母质粒DNA提取试剂盒
编号：BTN70202
英文名称：Yeast plasmid DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是专门用于提取酵母质粒DNA的产品(不适用于酵母dsRNA质粒)。本产品根据酵母细胞壁十分坚硬的特点，在细菌质粒碱裂解法的基础上，增加了高效裂解酵母细胞壁的预处理步骤，可在1小时左右得到可以用于PCR或转化酵母质粒DNA。

试剂盒特点：
1.快速，整个过程只需要一个小时左右，可同时处理多个样品。
2. 得到的酵母质粒DNA 纯度高，可直接用于转化和PCR等实验。
3.可以从平板上的菌斑或液体培养的酵母中抽提质粒DNA。
4. 安全，不需使用玻璃珠、酚、*仿等试剂。
5. 每5-10mL 酵母培养液一般可以提取到1μg左右的高拷贝酵母质粒DNA。
6. 即开即用，经济实惠，客户自己不需要准备额外的试剂。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	30ml
溶液B	13ml
溶液C	13ml
溶液D	18ml
破壁酶	50mg
RNase A溶液10mg/mL)	0.15ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(RNase A溶液4℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 将5-10mL 酵母过夜液体培养物分多次转移到1.5mL塑料离心管中。每转移一次后，需要12000～15000×g室温离心1分钟，然后吸弃液体培养基。注意：不要使用培养时间超过16小时的酵母液体培养物，否则质粒DNA产量偏低；也不要使用超过10mL的酵母液体培养物，否则破壁不充分，降低质粒DNA产量。
2. 加入1mL自备的无菌水，充分震荡混匀，12000～15000×g室温离心1分钟，吸弃上清。
3. 加入600μl溶液A，充分震荡细胞沉淀重悬，95℃保温10分钟。
4. 12000～15000×g室温离心1分钟，弃上清液。
5. 加入250μl含破壁酶的溶液B(配制方法是将本试剂盒提供的50mg 粉末状的破壁酶和0.15mL RNase A溶液全部加入到装有13mL溶液B的塑料瓶中，轻柔摇晃混匀后使用。未用完的部分需要分装成小份然后放-20℃保存，否则破壁酶很容易失去活性)，吹打混匀。
6. 37℃保温30分钟，延长保温时间到60分钟有利于细胞壁的裂解。注意：放置较长时间后，溶液B中的裂壁酶会逐渐失活，额外再加入一些裂壁酶(如蜗牛酶、Lyticase、Zymolyase、Lywallzyme等，总浓度为1mg/mL)可以极大提高产量。
7. 将离心管放冰浴冷却后，加入250μl溶液C，轻轻颠倒混匀直至裂解液变得澄清，然后室温放置5-10分钟。注意：不要剧烈震荡，否则基因组DNA 将断裂并污染质粒DNA。
8. 加入350μl溶液D，轻轻颠倒混匀几次，管内将出现白色沉淀物，然后冰浴放置10-30分钟(如果质粒较长，最好放置30分钟)。
9. 12000～15000×g室温离心6-10分钟，将上清液转移到离心吸附柱中。
 注意：不要将漂浮在液面的沉淀物(如果有的话)转移到离心吸附柱中。上清液可以分多次转移。
10.室温下放置至少2分钟以让质粒DNA 充分结合到离心吸附柱上。
11.12000～15000×g室温离心1分钟，弃穿透液。
12. 将500μl 通用洗柱液加入离心吸附柱中，12000～15000×g室温离心1分钟，弃穿透液。
13. 重复上步操作一次。
14.12000～15000×g室温离心1分钟去除离心吸附柱中残留液体。不要此步省略，否则残留洗液将影响后续的电泳、PCR和转化实验。
15. 将离心吸附柱套在一干净的1.5mL塑料离心管中，加入30-100μl DNA 洗脱液2.0(加入的量取决于预期的DNA浓度)至离心吸附柱的膜的中央。
16.室温下放置至少2分钟。
17.12000～15000×g室温离心1分钟以洗脱DNA。
18. 如有必要，可以再加入适量DNA 洗脱液2.0洗出残留的DNA。第二次洗脱得到的DNA的产量约为第一次的30-50%。不要将已经洗脱的、含DNA的溶液再加上去。


核酸内切酶IV 工具酶关键词：核酸内切酶IV,BTN130638,Endonuclease IV

BTN130951 革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(Southern级) Gram positive bacteria DNA extraction kit(Southern Grade)
WE0273 微量BCA蛋白定量试剂盒 Micro BCA Protein Assay Kit
SV0801 Nt.AlwI切刻内切酶 Nt.AlwI切刻内切酶
SY0611 重组人表皮生长因子 Recombinant Human EGF
BTN100885 X-gal干粉 X-Gal Powder
YT284 一氧化*(代"氮")清除剂(Hemoglobin) Nitric Oxide Scavenger
SV1517 α1-2,3 甘露糖苷酶
BTN120630 荧光素-12-dUTP溶液 Fluorescein-12-dUTP Solution
BTN130621 Taq DNA连接酶 Taq DNA Ligase
YT941 KSP抑制剂(SB-715992)(伊斯平斯) Ispinesib
HR0177 植物膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用) Plant membrane protein extraction kit (2D electrophoresis)
KFS322 MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
SV0116 BclI限制性内切酶 BclI Restriction Endonuclease
SY0348 预染蛋白质分子量标准(10～180kDa) Prestained Protein Ladder
KFS120 伊红染液
YT038 Western及IP细胞裂解液 Cell lysis buffer for Western and IP
SV1002 标准 Taq 反应缓冲液
核酸内切酶IV 工具酶关键词：核酸内切酶IV,BTN130638,Endonuclease IV


·一管式病毒RNA提取试剂盒
编号：BTN3073
英文名称：One-tube virus RNA extraction kit
规格：100次
本试剂盒是专用于血清(血浆)等液体样品中提取病毒RNA的纯化试剂。本产品回收率极高,尤其适合于整合到临床RT-PCR检测试剂盒中。且能用于提取其他液体样品和微量样品。

产品特点：
1. 回收率达到90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
2. 灵敏度高，RT-PCR检测到的最终灵敏度可以达到50-100拷贝/mL(对HIV和HCV)。
3.一管式操作，不使用离心柱，整个操作过程均在室温下完成。
4. 无毒环保，不需要使用*酚和*仿等有毒的有机溶液。
5.可放量，如果加上病毒离心富集步骤，每管最多可以处理样品1.5mL。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	30ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：准备工作
1. 血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD，不能是肝素。使用ACD时由于所加入ACD会增加体积，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。
2. 用于制备血浆的全血在2-25℃放置的时间不能超过6小时，在此时间内，可以室温800-1600g离心20分钟，上清即为血浆。
3. 血浆可以在2-8℃或更低温度下运输，可以在室温放置一天，2-8℃放置5天，-20℃以下长期保存。
4. 血浆最好按0.6mL/管的量分装保存，以避免反复冻融。
5. 实验前所有试都必须放置在室温。
6. 实验当天新鲜配制70%的乙醇。

二：病毒提取操作
1. 标记1.5-2mL螺旋盖塑料离心管(如Sarstedt CAT#:782.694.006)，为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。注意设置阳性和阴性对照。
2. 每管(包括正负对照管)中加入0.6mL病毒RNA提取试剂盒溶液(需提前融化)。
3.快速震荡样品几秒，再短暂离心，取0.2mL液体样品加入到已经装有0.6mL病毒RNA提取试剂盒溶液的管中。如果病毒需要富集，可以将1.5mL液体样品在4℃ 24,000 g冷冻离心60分钟，移弃1.3mL上清后在取用样品。
4.在正负对照样品管中分别加正负对照样品。
5.室温放置10分钟。此间可以在每个管上做个标记，以在下步区别向心面和离心面。
6. 振荡数秒后加入0.7mL室温异丙醇，旋紧盖后振荡30秒混匀，把离心管的向心面对向转头的中央，13,000-15000g室温离心至少15分钟。
7.小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀(此时可能看不见)。
8. 加入1.0mL室温70%乙醇，振荡数秒后 15000g室温离心5分钟。注意：在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。
9.小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀(此时呈膜状沉淀)。
10. 再短暂离心数秒，用移液器移弃残留液体(70%乙醇)，否则它会影响后续反应。
11. 加入200μl RNase-free水或百奥莱博的1×液相RNase Scavenger(能灭活残留的RNase，而RNase-free水无此功能)，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状RNA沉淀，溶液将呈混浊状,含少量不溶物。由于不溶沉淀物中含有RNA，所以不要离心后取上清使用，必须取混合液使用，哪怕很浑浊。
12. 直接取适量用于RT-PCR，如果溶于200μl水,同时样品使用量不超过RT-PCR体系的1/2，不溶物一般不会影响RT-PCR。剩余样品可以室温放置2小时，也可保存于-80℃保存一个月。

疑难解答：
Q：提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难？
A：原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存，每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万个RNA分子)，同时其长度也十分有限(是细胞基因组的万分之一以下)，样品中病毒数往往也不是很多，使得样品中核酸的绝对量几乎是微乎其微，十分容易丢失。另外，由于得到的核酸量少，不能使用电泳和测OD检测，只能通过PCR或RT-PCR检测，而病毒RNA往往具有稳定的二级结构，进一步增加了鉴定的难度(即不知道是RNA提取的问题还是RT-PCR的问题)。
Q：如何判断是病毒RNA没提取出来还是提取出来了但没有RT-PCR成功？
A：在RT-PCR反应中加阳性和阴性对照。

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