北京现货柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)特价促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)特价促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)特价促销
编号：BTN80803
规格：50次
英文名：Animal mitochondrial DNA column extraction kit(PCR Grade)
品牌：百奥莱博
产地：北京
线粒体DNA(mtDNA)是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料，但传统的两步式mtDNA提取方法是先温和裂解细胞，分离线粒体，然后再从线粒体中提取mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制，需要针对不同组织材料单独进行优化。本试剂盒克服了上述缺点。

产品特点：
1. 不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。
2. 得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3. 每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。
4. 注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大，非常难提。

产品组成：

 

成分	规格
溶液A	13ml
溶液B	13ml
溶液C	18ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，短期可以在室温放置；长期保存最好放4℃。

使用方法：

一：培养细胞预处理
1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞，离心收集后弃上清。
2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次，离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二：组织细胞预处理
3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小最好)，转移到1.5mL塑料离心管中，用于mtDNA提取。注意：最好不要使用冻存的动物组织，因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破，使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解，影响回收率。
三：血液预处理
4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟，取白细胞层。
5. 用自备PBS洗涤白细胞两次，得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。
四：mtDNA提取
5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A，充分吹打分散。如果是剪碎的组织，不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。
7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。
8. 加入350μL冰浴的溶液C，温和混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后放冰上放置20-25分钟。
9.室温12000～15000g离心10分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。
10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合，此步十分重要。
11.室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中的废液。
12. 加入500μL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中废液。
 注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
13. 重复上步1次。
14.室温12000～15000g离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中，加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
16.室温12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强，如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于第一次洗脱的20-30%)，但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。
18. 12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩，可以使用本公司的核酸浓缩剂。
19. 由于DNA机械断裂，电泳时DNA可能不呈现专一的带，但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

更多有关北京现货柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)特价促销的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·Southern级真菌DNA提取试剂盒
编号：BTN130943
英文名称：Fungus DNA extraction kit(Southern Grade)
规格：10次

·人源脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶
编号：BTN130634
英文名称：Apurinic-Apyrimidinic Endonuclease I
规格：1000U
人源脱嘌呤/脱嘧啶(AP)核酸内切酶APE1，也称为HAP1或Ref-1，与大肠杆菌外切酶III蛋白具有同源性。APE 1水解断裂脱嘌呤/脱嘧啶位点5´端的磷酸二酯键，产生单链DNA断裂，留下3´羟基和5´脱氧核糖磷酸末端。除具有AP核酸内切酶活性外，据报道APE1还具有弱的DNA 3´二酯酶、3´到 5´外切酶和RNase H活性。除 DNA修复活性外，APE 1还能通过一种氧化还原机制，体外调控许多转录因子的DNA结合活性。作为这个功能的一部分，APE 1已被证实能刺激Fos-Jun异源二聚体、Jun-Jun同源二聚体、Hela细胞AP-1蛋白以及包括NF-kB、Myb和ATF/CREB家族成员在内的其它几种转录因子的DNA结合活性。其反应示意图如下：


产品特点：
➤ 单细胞凝胶电泳(彗星试验)，彗星试验的推荐稀释倍数1:10³；
➤ 碱洗脱；
➤ 碱解旋；
➤ 改良切刻翻译。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在10μl总反应体系中，37℃条件下1小时，能切割20pmol含一个单独AP位点的34 mer寡核苷酸双链所需要的酶量。

AP位点的创建方法如下：37℃条件下，用1单位尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)处理20pmol含一个尿嘧啶碱基的34bp寡核苷酸双链2分钟。


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·单孢子全基因组扩增试剂盒
编号：BTN100942
英文名称：Single Spore Whole Genome Amplification Kit
规格：30次
本产品是用于从单个真菌孢子中扩增全基因组的试剂盒(此产品需自行分离单孢子)。

产品特点：
1.可以直接用孢子进行全基因扩增，避免了提取孢子DNA 过程中的样品损失。
2. 即开即用，不需要单独准备所需试剂。
3.基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和超强链取代能力，具有高保真高产量的特点，可以扩增单个孢子基因组达上万倍。
4.适用于各种真菌孢子样品。
5.产物可用于多种后续试验，包括酶切、克隆、文库构建、测序、基因芯片分析等。

试剂盒组成：

成分	规格
裂解液	75μl
WGA溶液A	150μl
WGA溶液B	300μl
Phi 29 DNA聚合酶(10U/μL)	15μl
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、破碎真菌孢子细胞壁
1. 将单个孢子转入2.5μl裂解液中，并且在显微镜下用微型针刺破细胞壁，90℃保温10分钟。
2. 加入5μl WGA溶液A和2.5μL超纯水，即可直接用于WGA。

二、WGA反应
1.在上步得到的10μl破碎了细胞壁的孢子样品中(已经加入了5μL WGA溶液A)，加入10μL WGA溶液B，轻柔吹打混合均匀。
2. 加入0.5μl Phi 29 DNA聚合酶(10U/μL)，轻柔吹打混合均匀。
3. 30℃保温3-12小时。最好使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴，最好在样品管中加入30-50μl石蜡油以防水分蒸发，因为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁，从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高，WGA三小时即可检测到DNA扩增。
4. 65℃保温10分钟使phi29 DNA聚合酶灭活。注：由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性，所以最好将其灭活以免干扰后续反应。
5. 立即取3-5μl WGA反应液进行电泳检测扩增效果。注意：WGA缓冲液中不含有甘油和电泳染料，所以需要先加上样缓冲液。
6.扩增的DNA可以用于后续试验或冰箱长期保存。


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SY0253 2×RNA上样缓冲液(含*化乙锭) 2×RNA?Loading?Buffer?(With??Ethidium?Bromide)
RFT163 2.5mM dNTP溶液 dNTP Mixture(2.5mM)
BTN130888 石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒 FFPE Total Protein Extraction Kit
ALH355 一管式定点突变试剂盒 One Tube Site-specific Mutagenesis Kit
YT600 丙*酸消旋酶 Alanine Racemase (Crude Enzyme)
BTN111105 MTT检测试剂盒 MTT Assay Kit
BTN90317 一站式DNA尿素-PAGE电泳套装 One-Stop DNA Urea-PAGE Pack
SV1372 5′ 去腺苷化酶
YT189 凝胶迁移探针生物素标记试剂盒 EMSA Probe Biotin Labeling Kit
BTN120625 ATP溶液(100mM) ATP Solution，100mM
SY0508 台盼蓝染色法细胞活力检测试剂盒 Typan Blue Staining Cell Viability Assay Kit
SV0529 NdeI限制性内切酶 NdeI Restriction Endonuclease
WE0178 细菌基因组DNA提取试剂盒 Bacteria Genomic DNA Extraction Kit

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