人趋化因子CXCL16检测试剂盒(ELISA方法)品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产供应人趋化因子CXCL16检测试剂盒(ELISA方法)品牌，我公司销*(代"售")全品类的ELISA试剂盒，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：人趋化因子CXCL16检测试剂盒(ELISA方法)品牌
编号：ZN2128
规格：96T
英文名：Human C-X-C motif chemokine 16 ELISA Kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法，用于体外定量分析人血清、血浆、细胞裂解液或细胞培养上清中CXCL16的含量。预先包被的抗体为CXCL16单克隆抗体，检测相抗体为CXCL16多克隆抗体，经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CXCL16呈正相关。

CXCL16属于CXC趋化因子的一员，主要由淋巴组织树突状细胞合成。基因表达时有246个*基酸，有趋化作用的是其中N-段88个*基酸。本试剂盒所用的标准品是重组人的CXCL16。

检测指标：C-X-C motif chemokine 16；CXCL16；Chemokine (C-X-C motif) ligand 16
检测范围：93.8pg/ml～6000pg/ml
特异性：系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性：＜1pg/ml

产品组成：

 

组分	规格	数量
预包被抗人CXCL16抗体的96孔板	96T	1板
重组人CXCL16标准品(冻干)	10ng/管	2管
生物素标记抗人CXCL16(100X)	130μl	1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)	130μl	1管
样品稀释液	30ml	1瓶
抗体稀释液	12ml	1瓶
ABC稀释液	12ml	1瓶
TMB显色液	10ml	1瓶
TMB终止液	10ml	1瓶
洗涤缓冲液(25X)	20ml	1瓶
封板膜		4张

储存条件：2-8℃（频繁使用时），-20℃（长时间不用时）。
有效期：6个月(4℃)；12个月（-20℃）。

注意事项：
1．使用前TMB显色液应为无色透明溶液，若发现颜色异常，请及时与我司联*(代"系")。
2．用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
3．要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。
4．为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
5．禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。
6．本公司提供的96孔酶标板是单条可拆型酶标板，用户可按需求使用，剩余的酶标板请按保存条件贮存。
7．揭封板膜和覆盖封板膜时应避免用力过大导致液体溅出。

需自备的仪器和试剂：
1．标准规格酶标仪。
2．自动洗板机。
3．恒温箱
4．系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器。
5．干净的试管和Eppendof管。
6．用去离子水将25X洗涤缓冲液稀释25倍，成1X洗涤缓冲液。

样品的准备和保存：
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
细胞培养上清：离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
血清：用干净试管收集血液，室温凝固30分钟，1500×g离心15分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
血浆：采用肝素或EDTA抗凝，抽血后30分钟内在2-8℃温度下，1500×g离心15分钟。为消除血小板的影响，建议在2-8℃进一步10000×g离心10分钟。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞裂解液：对于贴壁细胞，去除培养液，PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常10秒后，细胞就会被裂解。对于悬浮细胞，离心收集细胞，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打把细胞吹散，用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

参考标准曲线数据：(取自某一批次质检数据，仅供参考，用户需要自己建立标准曲线)

浓度(pg/ml)	0	93.7	187.5	375	750	1500	3000	6000
OD值	0.055	0.204	0.358	0.787	0.906	1.686	2.029	2.120

欲咨询购买人趋化因子CXCL16检测试剂盒(ELISA方法)品牌，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：
ZN2427 人可溶性TNF受体2(sTNF-R2)检测试剂盒 Human Soluble tumor necrosis factor receptor Ⅱ ELISA Kit
ZN2309 人淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)检测试剂盒 Human Lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor 1 ELISA Kit
ZN2629 小鼠糖蛋白130(GP130)检测试剂盒 Mouse Glycoprotein 130 ELISA Kit
ZN2032 人自分泌运动因子(ATX)ELISA试剂盒 Human Autotaxin ELISA Kit
ZN2831 大鼠表皮生长因子(EGF)检测试剂盒 Rat Epidermal growth factor ELISA Kit
ZN2234 人胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP-7)检测试剂盒(ELISA方法) Human Insulin-like growth factor-binding protein 7 ELISA Kit
ZN2554 小鼠二肽基肽酶4(CD26)(DPP-4)检测试剂盒(ELISA方法) Mouse Dipeptidyl peptidase-4 ELISA Kit
ZN2874 大鼠胰岛素样生长因子1(IGF-1)检测试剂盒 Rat Insulin-like growth factor 1 ELISA Kit
ZN2756 小鼠子宫珠蛋白(Uteroglobin)检测试剂盒 Mouse Secretoglobin family 1A member 1 ELISA Kit
ZN2159 人内皮细胞蛋白C受体(EPCR)检测试剂盒(ELISA方法) Human Endothelial protein C receptor ELISA Kit
ZN2479 人TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)检测试剂盒 Human TNF-related apoptosis-inducing ligand ELISA Kit
ZN2799 小鼠转化生长因子β2 (TGF-β2)检测试剂盒 Mouse Transforming growth factor beta 2 ELISA Kit
ZN2681 小鼠层连蛋白(Laminin)检测试剂盒 Mouse Laminin ELISA Kit
人趋化因子CXCL16检测试剂盒(ELISA方法)品牌关键词：人趋化因子CXCL16检测试剂盒(ELISA方法),Human C-X-C motif chemokine 16 ELISA Kit,ZN2128


·ECM Kit(小鼠IgM)
编号：ZN1929
规格：1盒
用途：适于一抗为小鼠 IgM的Western Blotting 检测。
保存条件：4℃可保存一年 。
Western Blotting 检测试剂盒内容：
1.封闭试剂：10g 蛋白质干粉(脱脂奶粉)。
2.HRP 标记羊抗小鼠 IgM：亲和纯化抗体，经过人血清吸附以去除交叉抗体。效价 1：2000-10000。
3.ECM 显色剂：总量 100ml。含 A 液 5ml(×20倍)；B 液 5ml(×20倍)。每个试剂盒足够 10 张小膜或 800 c ㎡面积的膜显色
工作原理：
蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下 ,向着与其电荷相反的电极移动的现象。根据所采用的支持物不同,可分为：琼脂糖凝胶电
泳、淀粉凝胶电泳、聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳等。其中以聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(PAGE)最广泛。它的优点为：无电渗作用,样品用量少(1-100μg),分辨率高,可检出 10-9-10-12mol的样品,凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶。
SDS-PAGE 是最常用的定性分析蛋白质的电泳方式,它根据蛋白分子大小不同，迁移速率的不同而达到分离目的，特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量。
免疫印迹是将凝胶电泳的高分辨力和免疫化学检测的特异性融为一体。免疫印迹技术首先借助凝胶电泳将蛋白质抗原分离，然后将凝胶中的蛋白质转印到膜上使之成为被分离的一个拷贝。免疫印迹为检测样品中是否存在蛋白的抗原提供一种可靠的方法，该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特异性抗体结合的特性并通过相对迁移率来体现该蛋白的分子量。
如果想要了解样品中是否存在某一抗原，以及该抗原的含量或该抗原多肽链的相对分子质量以及亚型，是否与其他蛋白结合，蛋白质的酪*酸残基是否发生磷酸化等有关问题均可采用免疫印迹。
免疫印迹包括多个简单步骤，可在一到两天完成，该方法具有高效，简便，灵敏等特点。
实验操作步骤：
1．蛋白质的样品制备：
1)细胞培养蛋白质样品的制备：
1：胰酶消化后裂解：细胞培养至 80%左右密度时，以含 0.25%胰蛋白酶消化,室温，低速离心，弃上清。细胞经预冷的PBS 漂洗3次，加入 0.1-1ml 裂解液(根据细胞数量定)反复吹打。
2：皿上直接裂解：细胞培养至 80%左右密度时，细胞经预冷的PBS 漂洗3次，加入 0.1-1ml 裂解液(根据细胞数量定)，用细胞刮刀收集，转移至离心管中，反复吹打。
2)组织样品的制备：新鲜组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，按组织净重：裂解液=1：10-20的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆，离心收集上清(如有粘稠物可超声处理)
3)蛋白变性：处理后的样品加入样品缓冲液(按样品浓度 1：1 或 1：2的比例)混匀，样品置 1000C的水浴箱加热 3-5分钟，10000g 离心 10分钟，取上清液。(样品可立即使用也可以分装冻存，-20℃可稳定保持数月。)
2．SDS-PAGE 电泳：
1)．制 胶：①按比例配制分离胶(丙*(代"烯")酰胺母液：单体：双体=29：1)，缓缓地摇动溶液，使激活剂混合均匀，将凝胶溶液平缓地注入两层玻璃极中，再在液面上小心注入一层水或正丁醇，以阻止氧气进入凝胶溶液中，37℃恒温箱中静置 60min。
②同前按比例配制浓缩胶，但混匀溶液时不要过于剧烈以免引入过多的氧气。吸去不连续系统中下层分离胶上的水分，以连续平稳的液流注入凝胶溶液，然后小心插入梳子并注意不得在齿尖留有气泡，37℃恒温箱中静置60min 以上以保证完全聚合。
2)加 样：依次加入标准品和待分析样品。(加样时间要尽量短，以免样品扩散，可在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免边缘效应。样品一般在 1.0mm 厚的胶 加样 50-100ug/lane)。
3)电 泳：加样完毕，选择适当的电压进行电泳即可。一般采用恒压浓缩胶 55V，分离胶 75V，电泳直至*酚蓝染料前沿下至凝胶末端处，即停止电泳。
3．转 膜：蛋白质经 SDS-PAGE 分离后，从凝胶中转移到固相支持物上，常用的支持物有：硝酸纤维膜即 NC 膜(AR0135)或 PVDF 膜。Tris/甘*酸-SDS-PAGE 结束后，取出凝胶，在 Tris/甘*酸缓冲液中漂洗数秒。蛋白质从凝胶向膜转移的过程普遍采用电转印法，包括湿式电转印和干式电转印。
1)干式电转印：将转印槽阴极平放工作台上，并在上面加三张电转印液浸透的1mm厚的滤纸，将电转印液浸透 0.45μm的N.C 膜放在滤纸上，再将凝胶平放在 N.C 膜上，最后在凝胶上加盖三层电转印液浸透 1mm 厚的滤纸，电流根据凝胶面积按1-2 mA/cm2,接通电源，经 1-1.5 小时电转印。
2)湿式电转印：打开电转印夹，每侧垫上一块专用的用转印液浸泡透的海面垫，再各放三块转印液浸透的滤纸，滤纸与海面垫大小相同或与 NC 膜、凝胶大小相同均可，将凝胶平放在阴极侧滤纸上，最后将 NC 膜平放在凝胶上，按照(-)夹板-海棉-滤纸-胶块-NC 膜-滤纸-海绵-夹板(+)装好,依次除尽每层间气泡，夹好电转印夹。 电泳槽加满预冷电转印液，插入电转印夹，将电泳槽放入冰箱内，连接好电极，接通电流，转印夹的NC 膜应对电泳槽的正极,4℃ 250-300mA,转印 80min(根据分子量不同，转印时间可适当调整)。
4、膜的封闭：漂洗转印膜,室温，3次 x10min,以尽量洗去转印膜上的SDS(以免影响抗体的结合)，放入 0.02M TBS 缓冲液配置的5%脱脂奶粉和 1%的BSA 混合的封闭液内，摇床摇动，室温封闭 2h 或 4℃过夜。1×TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗10min。
5、抗体杂交：1)封闭后的杂交膜放入杂交袋中，加入用 0.02M TBS 缓冲液配置的2%脱脂奶粉和 1%的BSA 混合的稀释液适当稀释的适当稀释的一抗，4℃孵育过夜或 37℃孵育2h，1×TBS-T ，PH7.6洗液洗膜 3次 x10min。(一抗的稀释度，孵育时间，温度与显色强度，背景有直接关系。一般来说，阳性不强时可提高一抗浓度和延长孵育时间，而背景高，非特异性条带多，则降低抗体浓度和孵育时间)。
2)用 0.02M TBS 缓冲液配置的2%脱脂奶粉和 1%的BSA 混合的稀释液适当稀释过氧化物酶标记羊抗小鼠 IgM 孵育膜，20℃-37℃,1.5 小时或4℃过夜，1×TBS-T洗膜 3 x10min。
6、显色(ECM)
ECM 显色剂配制:按 1ml 蒸馏水，加显色剂 A、B 各 1 滴混匀。将杂交后印迹膜放入显色盒中,加上混合好的显色液反应约 1-5分钟。吸去印迹膜边缘显色液,将一透明的玻璃纸盖住抚平,以确保×感光胶片的干燥。印迹膜转入暗室中使胶片曝光 30＇-5分钟。
7、显影，定影。 将曝光后的×感光胶片放入显影液中冲洗至胶片上出现条带或者胶片透明为止,再放入定影液中定影，胶片可长期保存。


人趋化因子CXCL16检测试剂盒(ELISA方法)品牌关键词：人趋化因子CXCL16检测试剂盒(ELISA方法),Human C-X-C motif chemokine 16 ELISA Kit,ZN2128


·HOXA5 mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN0673
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：rat
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.HOXA5 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
HOXA5的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

北京百莱博科技有限公司是人ELISA试剂盒产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购人趋化因子CXCL16检测试剂盒(ELISA方法)品牌。