人血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)ELISA试剂盒 人E

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产供应人血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)ELISA试剂盒 人ELISA试剂盒，我公司销*(代"售")全品类的ELISA试剂盒，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：人血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)ELISA试剂盒 人ELISA试剂盒
编号：ZN2026
规格：96T
英文名：Human Angiopoietin-related protein 3 ELISA Kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法，用于体外定量分析人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液或细胞培养上清中ANGPTL3的含量。预先包被的ANGPTL3抗体和检测相抗体都是多克隆抗体。检测相抗体经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人ANGPTL3呈正相关。

检测指标：Angiopoietin-related protein 3；Angiopoietin-like protein 3；ANGPTL3
检测范围：0.312g/ml～20ng/ml
特异性：系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性：＜10pg/ml

产品组成：

 

组分	规格	数量
预包被抗人ANGPTL3抗体的96孔板	96T	1板
重组人ANGPTL3标准品(冻干)	20ng/管	2管
生物素标记抗人ANGPTL3(100X)	130μl	1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)	130μl	1管
样品稀释液	30ml	1瓶
抗体稀释液	12ml	1瓶
ABC稀释液	12ml	1瓶
TMB显色液	10ml	1瓶
TMB终止液	10ml	1瓶
洗涤缓冲液(25X)	20ml	1瓶
封板膜		4张

储存条件：2-8℃（频繁使用时），-20℃（长时间不用时）。
有效期：6个月(4℃)；12个月（-20℃）。

需自备的仪器和试剂：
1．标准规格酶标仪。
2．自动洗板机。
3．恒温箱
4．系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器。
5．干净的试管和Eppendof管。
6．用去离子水将25X洗涤缓冲液稀释25倍，成1X洗涤缓冲液。

参考标准曲线数据：(取自某一批次质检数据，仅供参考，用户需要自己建立标准曲线)

浓度(pg/ml)	0	312	625	1250	2500	5000	10,000	20,000
OD值	0.096	0.220	0.286	0.505	0.814	1.279	1.970	2.589

除人血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)ELISA试剂盒 人ELISA试剂盒外，我公司正在打折促销以下产品：

·增强型蛋白印迹膜再生液
编号：ZN1922
规格：100ml
产品保存：4℃保存，一年有效
产品说明：增强型蛋白印迹膜再生液能够安全高效地从硝酸纤维素膜和 PVDF 膜上去除一抗和二抗，且不会破坏抗原，从而再次检测化学发光的免疫印迹。与重新跑一个SDS-PAGE 胶比较，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。
产品特点：
1.不需重新制胶电泳
2.节省珍贵样品，在同一张膜上使用相同的样品重新检测
3.高效，去除效果远优于自制缓冲液
4.温和配方，在抗体剥离及重新检测时不会对靶蛋白造成伤害
5.不含硫醇，无刺鼻气味
产品应用：
1.可重复使用硝酸纤维素膜或 PVDF 膜，通过不同的一抗检测不同的标靶
2.可重新检测印迹，改正或优化初次实验中无效的抗体浓度
注意事项：
1.刚从冷冻保存中拿出来会出现 SDS的沉淀，建议温水溶解再使用。
2.建议先检测表达量较低的目的蛋白，用再生液处理后检测表达量高的蛋白。
3.本品适用于 NC 膜和 PVDF 膜，推荐使用 PVDF 膜，效果更佳。
4.本产品适用于 HRP 标记的二抗，且用化学发光法检测的印迹膜。
需要材料：
1.化学发光底物
2.用含 0.05%Tween-20的TBS 或 PBS
3.用于第一次和第二次蛋白质印迹实验的一抗和二抗
4.胶片，化学发光成像仪
使用方法：
注：膜可以 4℃保存在 PBS 或 TBS 中，直到可以进行剥离程序。
1．将再生液用温水溶解或室温平衡至溶解。
2．用 TBS-T 或 PBS-T 将膜洗10分钟×3次。
3．将印迹膜放入再生液中，室温孵育20-30分钟。使用足够的体积以确保印迹膜完全润湿(对于8×10cm 印迹需要约 20mL)。
注意：优化孵化时间和温度对于获得最佳结果是必不可少的。对于一些抗体，室温孵育就足够了。
然而，高亲和力抗体可能需要再温育5至10分钟。
4.用 TBS-T或 PBS-T将膜洗10分钟×3次。
5.按如下方法检测：
A.完整去除二抗的测试：将膜进行发光检测，如果 5分钟内未检测到信号，则二抗已经成功地从抗原或一抗中去除。
B.完整去除一抗的测试：用 HRP 标记的二抗孵育膜，然后用洗涤缓冲液洗涤。孵育新的一抗和二抗，进行发光检测，如果 5分钟内没有检测到信号，则已经成功地将一抗从抗原中除去。
6.如果在步骤 5 中检测到信号，则返回步骤 2，再剥离 5-15分钟。一些抗原/抗体系统需要更高的温度或更长的孵育时间来完全去除它们。优化剥离时间和温度以确保完全去除抗体，同时防止对抗原的损伤。
7.确定膜被适当剥离后，可以进行第二次免疫印迹实验。
注意：1.印迹可以剥离和重复检测多次，但可能需要更长的曝光时间或更灵敏的化学发光底物。
如果抗原在再生液中变得不稳定，随后的反应可能导致信号降低。
2.剥离后建议重新封闭印记膜。


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ZN2529 小鼠组织蛋白酶B(Cathepsin B)检测试剂盒 Mouse Cathepsin B ELISA Kit
ZN2850 大鼠CD44检测试剂盒 Rat Cluster of differentiation ELISA Kit
ZN2732 小鼠肽聚糖识别蛋白1(PGLYRP1)检测试剂盒 Mouse Peptidoglycan recognition protein 1 ELISA Kit
ZN2135 人半胱*酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)ELISA试剂盒 Human Cystatin B ELISA Kit
ZN2455 人组织基质金属蛋白酶抑制剂4(TIMP-4)检测试剂盒 Human tissue inhibitor of metalloproteinases 4 ELISA Kit
ZN2775 小鼠TNF受体超家族成员19(TNFRSF19)检测试剂盒 Mouse Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 19 ELISA Kit
ZN2657 小鼠白介素17受体C(IL-17RC)检测试剂盒 Mouse Interleukin-17 receptor C ELISA Kit
ZN2060 人趋化因子CCL1检测试剂盒(ELISA方法) Human C-C motif chemokine 1 ELISA Kit
ZN2380 人R-spondin1(Rspo1)检测试剂盒(ELISA方法) Human R-spondin-1 ELISA Kit
ZN2700 小鼠MEP-1A检测试剂盒(ELISA方法) Mouse Meprin A subunit alpha ELISA Kit
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·GluR1 mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN0595
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman,rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.GluR1 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
GluR1的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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