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- 详细信息
- 文献和实验
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221
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连桥生物
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现货
- 保修期:
见说明
- 规格:
见说明
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文献和实验细胞。刮去每块板上的细胞到 1 ml 冰冷的 EBC 裂解缓冲液中。 将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中,在微量离心机上 4 ℃ 以最大速度离心 15 min。 收集上清(约 30 ml)并加入 30 μg 的适当抗体,4 ℃ 摇动免疫沉淀物 1 h。 加入 0.9 ml 的蛋白质 A-Sepharose 悬液,4 ℃ 摇动免疫沉淀物 30 min。 用含 900 mmol/L NaCl 的 NETN 洗蛋白 A-Sepharose 混合物,再重复洗 5 次。最后,用 NETN 洗
泵抽吸,也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干;e.重复操作 c 和 d,洗涤 3-4 次(或按说明规定)。 微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的,非离子型洗涤剂既含疏水基团,也含亲水基团,其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合,从而削弱蛋白质与固相载体的结合,并借助于亲水基团和水分子的结合作用,使蛋白质回复到水溶液状态,从而脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温 20,其浓度可在 0.05%-0.2% 之间,高于
g ,加1mol/L HCl 48ml,加重蒸水80ml使其溶解,调pH6.7,定容至100ml, 4℃保存。5. TEMED(四乙基乙二胺)原液6.10%过硫酸铵(用重蒸水新鲜配制)7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液:称取Tris6.0g,甘氨酸28.8g,加蒸馏水约900ml,调pH8.3后,用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存,临用前稀释10倍。8. 考马斯亮蓝G250染色液:称100mg考马斯亮蓝G250,溶于200ml蒸馏水中,慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸,最后补足水
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