MC3T3-E1 Subclone 14（小鼠颅顶前骨细胞亚

MC3T3-E1 Subclone 14 小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14 Cat NO.: CL-0378
细胞名称	MC3T3-E1 Subclone 14（小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14）
种属	小鼠
年龄（性别）	新生
组织来源	颅顶骨
生长特性	贴壁
细胞形态	成纤维细胞样
背景描述	从克隆的但是表型各异的MC3T3-E1细胞系中分离出一系列亚克隆，从含抗坏血酸培养基生长的成骨细胞中选择高或低成骨细胞分化、矿化的亚克隆。MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14在抗坏血酸和3-4mM无机磷酸盐中生长表现出高水平的成骨细胞分化。它们10天后形成一个矿化良好的细胞外基质(ECM)。MC3T3-E1 Subclone 24和MC3T3-E1 Subclone 30在抗坏血酸中生长表现出很差的成骨细胞分化，不形成ECM，可以作为MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14的阴性对照。矿化的亚克隆选择的表达作为成骨细胞标记的mRNA及唾液酸糖蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)和甲状旁腺激素/甲状旁腺激素相关蛋白受体的mRNA。高或者低的分化潜能的亚克隆在培养中生产出相似数量的胶原质，表达可比较的基本水平的mRNA编码Osf2/Cbfa1，一种成骨细胞相关转录因子。植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亚克隆形成与骨类似的形成小骨的编织骨，低分化细胞只是产生纤维组织。这些细胞系是研究体外成骨细胞分化的好模型，尤其是ECM信号。它们和原代培养颅顶成骨细胞的行为类似。
生长培养基	MEMα(货号:PM150421)＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)
培养条件	气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃

COV434 人卵巢颗粒肿瘤细胞 Cat NO.: CL-0527
细胞名称	COV434（人卵巢颗粒肿瘤细胞）
种属	人
年龄（性别）
组织来源
生长特性	贴壁
细胞形态	上皮细胞样
背景描述
生长培养基	DMEM高糖(货号:PM150210)＋20% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)
培养条件	气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃

MC3T3-E1 Subclone 14（小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14）培养方法：
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

原代细胞与细胞系有什么区别？
     细胞培养物来源于原代外植体或分散的细胞悬液。通常在这样的培养物中细胞增殖形成汇合地单层细胞或密集地细胞悬液。根据传统定义，第一次收获和接种的细胞被称为原代细胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 这类细胞生命周期有限，在有限的生命周期内需掌握好细胞最大的生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的一致性。细胞系是不断生长，分化的细胞群，因其经过遗传改造，致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。实际上，连续细胞系可以用大量次培养基培养，随着代数的增加细胞的基因型和表型都有可能发生改变。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。
1、倍增和代数有什么区别？倍增是培养物中细胞总数加倍，通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出，传代培养过程的次数，传代培养的目的是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。
2、接收到的冻存细胞该如何处理？收到包装箱后，立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快以避免升温。不要将细胞储存在-80℃，这样会对细胞造成不可挽回的伤害。
3、有多少经验才能开始正常人类细胞培养？推荐有经验者在无菌环境下用层流净化罩工作，如果有经验的话对其它细胞类型也是很有利的。如果你是细胞培养的初学者或打算建立细胞培养实验室，我们会为你提供帮助。请联系我们的细胞培养专家。

 

 

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