Cathepsin B mRNA原位杂交试剂盒销售

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖Cathepsin B mRNA原位杂交试剂盒销*(代"售")在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：Cathepsin B mRNA原位杂交试剂盒销*(代"售")
产地：国产|进口
规格：100T
编号：ZN0204
品牌：百奥莱博
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman,rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Cathepsin B mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Cathepsin的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

除Cathepsin B mRNA原位杂交试剂盒销*(代"售")外，我公司正在打折促销以下产品：

·超敏化学发光底物(A液+B液)
编号：ZN1944
规格：1盒
产品保存：4℃密封避光保存，一年有效
产品说明：Western blot 底物发光检测试剂是一种高灵敏度的增强型化学发光底物试剂，采用独特的发光底物系统，并对成份进行了优化。产品背景低，稳定性好，信号的灵敏度及强度高，发光时间持久。比普通 ECL 试剂敏感度高数十倍。用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP的抗体及其关联的抗原。可以灵敏地检测出目的蛋白的存在。它由辣根过氧化物酶(HRP)催化发生化学反应，发出荧光，可对×光胶片曝光，也可直接进行 lμminometer 检测或者荧光 CCD 扫描。
产品特点：
1．高信噪比，背景低。
2．发光迅速。
3．可在日光灯下进行发光操作。
4．灵敏度高：可检测 femto 级抗原。
5．发光持续时间长，可进行反复曝光，进行结果优化，而不需重复 Western blot。
6．节约抗体，包括一抗二抗。超敏化学发光检测试剂因灵敏度高，可使用较高抗体稀释比例。一抗稀释 1:1000-1:5000 或 0.2-1.0μg/ml ；二抗稀释 1:20000-1:100000 或 10-50ng/ μl。
使用方法：
1．执行常规 SDS－PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。
2．膜的封闭:用 TBS-T 液洗涤印迹膜 10minX2。放入 5%脱脂奶粉封闭液内，摇床震动，室温封闭1小时。
3．一抗孵育：去除封闭液，并加入稀释好的一抗，用摇床震动，室温孵育2h 或 4℃孵育过夜。
注意：最好使用推荐的一抗稀释比例，稀释一抗使用封闭液稀释。
4．用 4-6倍 TBS-T洗涤印迹膜，10minX3。增加洗液量，和/或洗膜的次数可降低背景。
注意：洗涤之前，用 TBS-T洗液将印迹膜进行简单的漂洗，将会增加洗膜的效果。
5．二抗孵育：将一抗孵育后的印迹膜放入适当稀释的HRP 标记的二抗中孵育，摇床震动，室温孵育2 小时。
注意：最好使用推荐的HRP 标记二抗的稀释比例，稀释二抗使用封闭液稀释。
6．重复第 4 步，以去除非特异性 HRP 标记二抗的结合。
注意：与 HRP 标记二抗孵育后，必须彻底地清洗印迹膜。
7．制备工作液：按每 1 ml 蒸馏水加 A 液和 B 液各 50μι，混匀组成作液即可使用。用量以充分覆盖印迹膜为基准。每10cm2膜需要大约1ml工作液。
8．将印迹膜有蛋白的一面朝上平整的铺在一张平板上，加上配好的发光底物工作液。
9．将印迹膜与工作液孵育1-5min。
注意：孵育的时间可以在暗室里观察，以判断是否进行胶片曝光。
10．将一洁净的保鲜膜或透明的玻璃纸平整的铺在孵育有工作液的印迹膜上，只要保鲜膜或透明的玻璃纸比较大可以不用吸除多余的工作液，轻轻赶出其间的气泡。
11．在暗室中取一张×胶片小心置于膜上，曝光 5 秒至 1分钟，立即显影定影。
注意：根据其发光的强度,缩短或延长×片的曝光时间(对微弱信号，曝光时间可延长至数小时),或者曝光一系列不同的时间后再显影定影挑选一张满意的。也可用合适的照相器材直接记录蛋白膜的化学发光图像。工


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叶绿体提取试剂盒   50T|100T
ARB10762 人抗EB病毒抗体(EBV)含量测试 Human anti-epstein-barr virus antibody,ebv ELISA KIT
BL1049 鱼蛋白胨
RN0701 EASYspin 组织/细胞RNA快速提取试剂盒
ARB11468 人胰岛素受体底物2(IRS-2)Elisa分析 Human insulin receptor substRate 2,irs-2 ELISA KIT
ARB12790 小鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)elisa测定使用说明书 Mouse β2-glycoprotein 1 antibody iga/g/m,β2-gp1 iga/g/m ELISA KIT
PY04-080  多粘菌素B  250IU/支×10支  每支添加于100ml改良SKIRROW培养基基础中，用于弯曲杆菌的分离培养
硼*(代"酸")盐溶液(0.1mol/L,pH8.5-10)   500ml
107-43-7 甜菜碱Betaine
ARB11028 人迟现抗原4(VLA4)ELISA代测服务 Human very late appearing antigen 4,vla4 ELISA KIT
75-12-7 Formamide,Deionized 去离子甲酰胺
13114-27-7 玉米素 Zeatin
5794-13-8 L-Asparagine L-天门冬酰胺
肥大细胞染色液(甲**(代"胺")蓝法)   100ml
ARB12706 大鼠糖缺失性转铁蛋白(CDT)含量检测 Rat carbohydRate-deficient transferrin,cdt ELISA KIT
硫代水杨酸 Beryllon II 147-93-3
BL0609 琼脂糖凝胶6B Sepharose 6B
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F030823 BIOTIN标记兔抗猴IgG抗体 Rabbit Anti-monkey IgG*BIOTIN
BL0047 人血清(H培养基)
ARB13000 小鼠抗红细胞抗体(RBC)ELISA检测服务 Mouse anti-red cell antibody ELISA KIT
BTN130808 显影粉 Developing Solution,Powder
乳糖酸 TPCK 96-82-2
BTN130801 ATP发光法细胞活力检测试剂盒 ATP Luminescent Cell Viability Assay Kit
植物蛋白快速提取试剂盒(离心柱法，2D电泳用)   50T|100 T
ARB10003 人1,3-二磷酸甘油酸(1,3-DPG)酶联免疫定量检测 Human 1,3-disphosphoglyceRate,1,3-dpg ELISA KIT
F030621 FITC标记兔抗山羊IgG抗体 Rabbit Anti-Goat IgG*FITC
ARB11852 人凝溶胶蛋白(GS)elisa检测说明书 Human gelsolin,gs ELISA KIT
PY01-007  鱼蛋白胨  250克  
BL0862 羊抗人IgM免疫血清 0.5ml

我公司强烈推荐基因结构和功能系列产品，热情期待您的咨询选购Cathepsin B mRNA原位杂交试剂盒销*(代"售")。