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639
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
置-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖北京现货DAB显色试剂盒×40(棕黄色)(WB专用)打折促销在内的细胞生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:北京现货DAB显色试剂盒×40(棕黄色)(WB专用)打折促销
编号:ZN1925
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
试剂盒中的内容及包装规格:
显色剂 A:DAB×40倍浓缩液,3ml。
显色剂 B:H2O2×40倍浓缩液,3ml。
显色剂 C:TBS×40倍浓缩缓冲液,3ml。
产品保存:置-20℃避光冷冻保存一年。
DAB是过氧化物酶最重要的显色剂之一。显色呈鲜艳的棕黄色,可用于 WesternBlotting,免疫组化及各种斑点检查法。本试剂盒采用液体性滴瓶包装,使用方便,并且减少了接触有潜在毒性的DAB。
使用方法:
1.DAB显色:使用 DA 显色试剂。按每2 ml蒸馏水加显色剂 A,B,C各1滴,混匀。
2.混匀后加至膜上。
3.室温显色。一般显色1-30分钟。若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。
4.观察,照相。
北京现货DAB显色试剂盒×40(棕黄色)(WB专用)打折促销正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·Rad51 mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN1204
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:hμman,rat,mouse
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.Rad51 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
Rad51的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
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B0701 绵羊血清(辐照灭菌) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
乙基纤维素 Sodium acetate anhydrous 9004-57-3
ARB12519 大鼠热休克蛋白47(HSP47)酶标法分析 Rat heat shock protein,hsp47 ELISA KIT
5,6-二甲*并咪唑 Kieselguhr 582-60-5
L-丝*酸 Hypoxanthine 56-45-1
软骨染色液(阿利新蓝法,pH1.0) 2×50ml
福氏完全佐剂 β-Glucuronidase
SJ0696 超低分子量蛋白Marker Ⅰ (3.3-20.1kD)
ARB10424 人布氏杆菌病(brucellosIs)ELISA代测服务 Human brucellosis (brucellosis) ELISA KIT
ARB11787 人聚集蛋白(AgrIn)elisa检测操作说明书 Human agrin ELISA KIT
ARB13843 猪干扰素-γ(IFN-γ)酶联免疫定量检测 Porcine interferon γ,ifn-γ ELISA KIT
ARB12761 小鼠FMS样酪*酸激酶3配体(Flt3L)代做ELISA实验 Mouse fms-like tyrosine kinase 3 ligand,flt-3l ELISA KIT
BTN90309 红细胞裂解液B型(流式细胞分析用) Red Cell Lysis Solution,Type B
ARB13321 山羊促黄体生成素(LH)血清中含量检测
甲基蓝水溶液 Methyl blue Solution 1% 100ml
*甲*(代"酚")紫 5-Aminovaleric acid 115-40-2
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30%丙稀酰胺溶液(29:1) 30% Acylamide Solution(29:1)100ml
四乙基*化铵 ONPG 71-91-0
ARB10205 人β2糖蛋白1抗体IgG(β2-GP1 Ab IgG)Elisa方法检测 Human β2-glycoprotein 1 antibody igg,β2-gp1 ab igG ELISA KIT
DP114 N96高纯度质粒小提试剂盒
ARB10096 人EB病毒IgA(EBv IgA)检测服务 Human epstein-barr virus iga,ebv iga ELISA KIT
ARB12241 大鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2/Flk-1)定量分析 Rat vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2,vegfr-2/flk-1 ELISA KIT
CYB162030 羊抗人IgA(α链特异)(抗血清) 0.5ml
SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒 30T
BTN130585 小鼠抗CBP标签单抗 Anti CBP-Tag Mouse Mab
RN1701 Acryl Carrier 核酸助沉剂
DP322 口腔拭子基因组提取试剂盒
PY02-087 玫瑰红*琼脂 250克
F030825 BIOTIN标记兔抗豚鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Guinea Pig IgG*BIOTIN
KP202 Fast HiFidelity PCR Kit
盐*(代"酸")*丙林 Arginine Sepharose 4B 137-88-2
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文献和实验保存 E.5×样品缓冲液,10ml 0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(Ph6.8)、5ml 50%的甘油、2ml 10%的SDS、0.5ml 2-巯基乙醇、1ml 1%溴酚蓝,0.9ml的蒸馏水,可在4℃保存数周,或在-20℃保存数月。 ③ 二抗稀释液 AP-Anti mouse IgG(Whole molecule),SIGMA,CAT#A-3562; AP-Anti mouse IgGAM,ZYMED,CAT#62-6422 一般采取1:3000
。如果用很小的探头(小于 3 mm),并把探头放于样品较深的位置,将导致超声破碎样本效果大打折扣。长时间的超声过程产生的热量会导致样品变性或者降解。为了阻止样本过热,超声过程中需要将样品管放在冰浴中,每次超声处理一段时间后需要在冰上暂停一段时间,用来减少热量的产生,每次超声的时间也可以优化。更多高级的超声仪可以设置时间、强度、暂停时间、重复超声次数等参数并储存为程序,以实现自动超声。CST 只用带探头的超声仪去准备样品,当处理 1 ml 的样品时,用 3 mm 的探头。我们一般推荐使用 35%-40
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