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- 库存:
953
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
4℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括即用型免疫组化试剂盒(SABC-AP)(山羊IgG)品牌在内的一系列细胞生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:即用型免疫组化试剂盒(SABC-AP)(山羊IgG)品牌
产地:国产|进口
编号:ZN1826
品牌:百奥莱博
适于一抗为山羊来源的抗体
产品规格:1KIT
保存条件:4℃可保存一年,应避免冷冻。
工作原理:
SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍,等电点 pI=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低。根据研究,SABC 大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶可以保证 SABC 具有很高的敏感性。所以 SABC 兼具高敏感性,低背景和操作简便等优点。SABC不仅有很强的信号放大作用,而且非常稳定。
试剂盒内容:
1.正常兔血清封闭液 6ml/12ml
2.生物素标记兔抗山羊IgG 6ml/12ml
3.SABC—AP(链酶亲和素—碱性磷酸酶)6ml/12ml
4.BCIP/NBT 显色剂(×20)0.5ml/1ml
5.水溶性封片剂 6ml/12ml
6.中性核固红 6ml/12ml
石蜡片染色步骤:
1.石蜡切片,常规脱蜡至水。
2.根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
3.封闭。滴加正常兔血清封闭液,37℃孵育30分钟。甩干,勿洗。
4.滴加适当稀释的一抗(山羊IgG),37℃孵育1~2 小时或 4℃过夜。0.01M TBS洗5分钟×3次。
5.滴加生物素标记兔抗山羊IgG ,37℃度孵育30分钟。0.01 M TBS洗5分钟×3次。
6.滴加 SABC—AP,37℃孵育30分钟。0.01 M TBS洗5分钟×4次。水洗1次。
7.显色:BCIP/NBT 用 0.01M TBS(pH9.0-9.5)按 1:20的比例稀释,混匀后加至切片。镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤。
8.核固红轻度复染。水洗,干燥后水溶性封片剂封片。
建议:
1.对于 AP(碱性磷酸酶)显色系统,请用不含磷酸根的缓冲液洗涤,如 TBS 缓冲液。
2.热修复可选用枸橼酸盐缓冲液、EDTA 抗原修复液、PBS 缓冲液、TBS 缓冲液等作为抗原修复液。
3.酶修复可选用复合修复液、抗原修复液Ⅰ(与热修复配合使用)、胰蛋白酶、胃蛋白酶消化组织。
除即用型免疫组化试剂盒(SABC-AP)(山羊IgG)品牌外,我公司正在打折促销以下产品:
·IMMT mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN0734
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:hμman,mouse
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.IMMT mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
IMMT的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
即用型免疫组化试剂盒(SABC-AP)(山羊IgG)品牌关键词:山羊IgG,SABC-AP,即用型免疫组化试剂盒(SABC-AP)(山羊IgG),百奥莱博,ZN1826
124-20-9 Spermidie 亚精胺(精咪)
柠檬酸 L-Carnosine 5949-29-1
BTN100947 环状DNA全基因组扩增试剂盒 Circular DNA WGA Kit
甲基黄指示剂 100ml
BFD070 鸡禽流感抗原检测卡
4-N,N-二甲基*基偶氮*-4`-异硫*酸酯 Phloroglucinol 7612-98-8
尿酸酶 1-Naphthylamine 9002-12-4
阿尔新蓝8GX Phenyl Sepharose CL-4B 75881-23-1
6055-19-2 环磷酰胺 Cyclophosphamide monohydrate
PY02-431 强化梭菌培养基 250克
磷钨酸* GAPDH 51312-42-6
胆固醇 Itraconazole 57-88-5
甲硝唑 FDPCa2 443-48-1
枸橼酸*抗凝剂(4%,无菌) 100ml
72-18-4 L-Valine L-缬*酸
ARB10263 人丁型肝炎IgM(HDV IgM)含量测试 Human hepatitis d virus igm,hdv igM ELISA KIT
Gey"s红细胞裂解液 Gey"s Lysis Buffer 100ml|500ml
ARB10868 人抗核周因子抗体(APF)尿液中含量检测 Human anti-perinuclear factor,apf ELISA KIT
ARB13612 兔子组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)免费代测 Rabbit tissue-type plasiminogen actilyse,t-pa ELISA KIT
25389-94-0 Kanamycin 硫*(代"酸")卡那霉素
司盘85 D-Cycoloserine 26266-58-0
β-葡聚糖酶 Span 40 9025-70-1
即用型免疫组化试剂盒(SABC-AP)(山羊IgG)品牌关键词:山羊IgG,SABC-AP,即用型免疫组化试剂盒(SABC-AP)(山羊IgG),百奥莱博,ZN1826
pH标准缓冲溶液(pH=6.86) 50ml|100ml
L-半胱*酸盐*(代"酸")盐无水物 GPDA 52-89-1
N6-*甲酰基腺嘌呤 Ethanethioamide 4005-49-6
2×Taq PCR Mastermix
膜蛋白提取试剂盒 Membrane protein extraction kit 50T|100T
ARB10706 人多巴胺脱羧酶(DDC)含量测试 Human dopamine decarboxylase,ddc ELISA KIT
*水溶液 0.1%|0.3%|0.5%|1% 500ml
*乐灵 BOC-Nim-benzyl-L-Histidine 1582-09-8
BL1380 20×SSC PH7.4
J0304 兔抗马IgG(H+L)抗血清 1ml/10ml
黄素腺嘌呤二核苷酸二*盐 PUC19 84366-81-4
BL1073 次高分子量蛋白标准
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购即用型免疫组化试剂盒(SABC-AP)(山羊IgG)品牌。
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文献和实验与其他免疫组化染色基本相似,有良好的可操作性。尽管SABC法操作简便,敏感性强,但是,在操作中仍然要遵循一定的原则,才能得到可信度高的结果。我所做的是《……》(题目略去,是2003年获国家自然科学基金专项基金项目,批准号:302400**)的动物实验部分。其中,需要利用抗β1-integrin观察深Ⅱ度烫伤大鼠局部在微电流治疗后β1-integrin的分布情况。应用的方法就是SABC法,试剂盒(即用型)来自博士德公司(不是为该公司做广告)。下面就按照实验步骤,谈一下我的一些体会。1、载玻片防脱片剂处理
的二抗和三抗。这种聚合物拥有强大的信号放大能力,同时有很强的组织细胞渗透力,经检测其灵敏度高于同类产品,特别是针对核抗原,其渗透性特别强,适合免疫组化的应用。此系列检测试剂与传统的三步法比较具有简单,快速,高敏感,低背景等特点。 原理示意图: 实验试剂 1. 即用型SABC(过氧化物酶)试剂盒(博士德货号SA1021,SA1022) 2. 即用型SV(HRP辣根过氧化物酶)试剂盒(博士德货号SV0001,SV0002
试剂: 即用型SABC(过氧化物酶)试剂盒(博士德货号SA1021,SA1022) 即用型SV(HRP辣根过氧化物酶)试剂盒(博士德货号SV0001,SV0002) DAB(黄色,博士德货号AR1022) Mayor`s苏木素(博士德货号AR0005) 所选一抗: KCA3.1(BA1788);PCNA(BM0104);Vimentin(BM0135) 注:抗体来源均为博士德公司 所选组织片:乳腺癌石蜡切片,肠癌石蜡切片,切片厚度为5微米 二.操作步骤
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