WE0262型哺乳动物蛋白抽提试剂盒促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖WE0262型哺乳动物蛋白抽提试剂盒促销在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：WE0262型哺乳动物蛋白抽提试剂盒促销
品牌：百奥莱博
规格：25次|100次
产地：国产|进口
编号：WE0262
  本试剂盒能够快速，温和，高效的裂解哺乳动物细胞，有效提取细胞浆和细胞核蛋白。该试剂使用温和配方保证所提取蛋白保持生物学活性并可应用于多种蛋白分析试验，如：报告基因和酶活性测定，免疫检测，蛋白纯化等。提取后蛋白可采用BCA法进行蛋白定量分析。哺乳动物蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。

试剂盒组成：

 

组份	25次	100次
Mammalian Protein Extraction Reagent	25ml	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	250μl	1ml

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本产品可有效裂解细胞培养板培养的贴壁细胞(无需刮取)以及离心收集的悬浮细胞，较反复冻融或超声法具有更高提取效率。但对于组织蛋白的抽提，建议使用组织蛋白抽提试剂盒(WE0260)。
2、表1中所列的是贴壁细胞蛋白提取的最佳使用量，先收集细胞可以减少试剂用量从而获得更高的蛋白浓度。
3、也可以根据细胞数量估计抽提试剂的使用量。如2×106个Hela细胞约重20 mg，需要加入200μl抽提试剂。
4、通过本产品提取的蛋白，可通过BCA法进行蛋白定量分析。

使用方法：

贴壁细胞蛋白抽提
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Mammalian Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、小心倾去贴壁细胞的培养液，使用PBS漂洗细胞。
3、加入适量Mammalian Protein Extraction Reagent(抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，在冰上用枪头吹打贴壁细胞，将裂解液转移至离心管中，冰上孵育20分钟，让细胞充分裂解(试剂使用量请参考附表1，冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
4、14000×g离心5-10分钟。
5、转移上清液至新管中，用于进一步分析。

悬浮细胞蛋白提取
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Mammalian Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、将悬浮细胞2,500×g，离心10分钟，弃去上清。使用PBS漂洗细胞。2,500×g，离心10分钟，弃去上清。
3、加入适量Mammalian Protein Extraction Reagent，抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail，即1×工作液。
4、每100 mg细胞加入至少1ml 1×工作液。如提取的样本量较大，可首先使用少量1×工作液重悬细胞，然后加入剩余工作液。
5、吹打均匀后，冰上放置20分钟，让细胞充分裂解(冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
6、14000×g离心15分钟。
7、转移上清至新管中，进行下一步分析。

附表1. 抽提试剂使用量推荐表

细胞培养板类型或平皿类型	抽提试剂使用量
100mm	500-1000μl
60mm	250-500μl
6孔培养板	200-400μl/孔
24孔培养板	100-200μl/孔
96孔培养板	50-100μl/孔

附表2. 常见问题及解决办法

问题	可能原因	解决方法
低提取率	低蛋白表达量	优化转染系统
	试剂使用量不够	增加抽提试剂使用量
	试剂无法溶解细胞膜	增加裂解时间或者加大晃动幅度
无法获得膜蛋白	更适合提取核浆蛋白	使用真核细胞膜蛋白抽提试剂盒

储存条件：-20℃

除WE0262型哺乳动物蛋白抽提试剂盒促销外，我公司正在打折促销以下产品：
ARB11596 人晚期糖基化终末产物(AGEs)酶标法分析 Human advanced glycation end products,ages ELISA KIT
喹*(代"啉")硫*(代"酸")盐 Histamine dihydrochloride 54957-90-3
丁香酸 GSH 530-57-4
淀粉样物质染色液(改良Highman刚果红法)   3×50ml
ARB12531 大鼠氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)含量分析 Rat oxidized lowdensity lipoprotein antibody,olab ELISA KIT
ARB10497 人白介素受体相关激酶(IRAK)ELISA代测服务 Human interleukin receptor associated kinase,irak ELISA KIT
*化底醚翁 Glycerol phosphate calcium salt 518-67-2?
金属硫蛋白 Vancomycin HC1
ARB11074 人软骨糖蛋白39(HC gp-39)酶联免疫定量检测 Human cartilage glycoprotein 39,hc gp-39 ELISA KIT
CYB162044 驴抗羊IgG(抗血清) 0.5ml
BOC-L-脯*醇 Nitrofurantoin 69610-40-8
二乙酸萤光素 L-Cysteine 596-09-8
哌*(代"嗪")-N,N-双(2-乙磺酸) Hydantoin 5625-37-6
DL-苹果酸* CAPS Sodium salt 17482-42-7
柠檬酸—柠檬酸*粉剂(10mmol/L,pH6.0)   1L|2L|10×1L
乙酸龙脑酯 IAA 5655-61-8
ARB10851 人抗骨骼肌抗体(ASA)检测服务 Human anti-somatic muscle antibody,asa ELISA KIT
PY01-072  糖化酶(1:100000)  250克  
ARB13092 小鼠细胞周期素D2(CyclIn-D2)elisa检测 Mouse cyclin-d2 ELISA KIT
WE0262型哺乳动物蛋白抽提试剂盒促销关键词：哺乳动物蛋白抽提试剂盒,Mammalian Protein Extraction Kit,WE0262


·新型固定组织基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0172
英文名称：NewPurify FFPE DNA Extraction kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从福尔马林固定、石蜡包埋组织中有效纯化基因组DNA。本品使用专门优化脱蜡剂和裂解液，释放福尔马林固定或组织切片样本中的DNA，不涉及有机试剂二甲*，无需过夜操作；消化后的样品在较高的温度孵育后，去除游离DNA的福尔马林交联，有效提高DNA的产量和纯度；优化的缓冲系统使裂解液中的DNA可特异结合到吸附膜上，抑制剂通过两步漂洗步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。同时配置高效微量吸附柱，洗脱体积可低至20μl。经过纯化的DNA可以直接用于PCR、Real-time PCR、SNP基因分型、STR基因分型、二代测序和药物基因组学研究等。
  从福尔马林固定、石蜡包埋样本中分离的DNA分子量通常低于新鲜或冷冻样本中的DNA。DNA片段化的程度取决于样本类型、储存时间以及固定的条件。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩)	13ml
Buffer GW2(浓缩)	15ml
Buffer EB	10ml
Buffer DS	10ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
离心吸附柱DF及收集管	50套
离心管(L-1.5ml)	50个

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、获得样品后，要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定，固定时间以14-24小时为宜，时间过长易导致基因组断裂，影响下游实验。如果甲醛固定时间过长或样本存放时间过久(＞1年)则易导致DNA完整性受损，无法扩出长片段。
2、确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制蛋白酶K 的作用。
3、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，以免影响其活性。
4、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入2μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如果需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。
7、实验开始前将水浴锅或恒温混匀仪预热至56℃。

操作步骤：

石蜡包埋样本
1、用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织后切成5-10μM的薄片。
2、取约1×1cm2的切片(共约3-8片切片)置于离心管(自备)中，加入160μl Buffer DS，涡旋震荡10秒。短暂离心将样本收集到管底。56℃孵育3分钟，水浴锅中取出后静置，降至室温后进行下一步操作。
注意：如果样品表面暴露在空气中，最初的2-3片弃掉不用。
3、上述管中加入180μl Buffer GTL，涡旋震荡混匀，12000rpm离心1分钟，溶液分为两层。取20μl 蛋白酶K 加入到下层溶液中，移液器小心吹吸混匀。
4、56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。12000rpm离心1分钟，使用200μl枪头沿管壁小心吸取下层的水相于新的离心管中。
注意：
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。
3)如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入2μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置2分钟。

福尔马林等固定液中的样本
1、取约20 mg的样本，切成小块，置于离心管中，加入500μl 10mM PBS(PH7.4)，涡旋振荡，12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，弃上清，重复3次。
2、上述管中加入180μl Buffer GTL，20μl 蛋白酶K ，涡旋震荡混匀。
3、56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。
4、12000rpm离心1分钟，使用200μl枪头沿管壁小心吸取上清到新的离心管中。
注意：如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入2μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置2分钟。
5、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡混匀后加入200μl无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即充分混匀。
2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
3)如果需要对多个样品进行操作，可以将Buffer GL和无水乙醇事先混匀后加样。
6、将步骤5所得溶液全部加入已装入收集管的吸附柱DF中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应。
10、将吸附柱置于一个新的1.5ml收集管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μlBuffer EB或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。

储存条件：室温(15～30℃)。


WE0262型哺乳动物蛋白抽提试剂盒促销关键词：哺乳动物蛋白抽提试剂盒,Mammalian Protein Extraction Kit,WE0262


·酵母蛋白抽提试剂盒
编号：WE0263
英文名称：Yeast Proein Extraction Kit
规格：25次|100次
  本试剂盒用于从酵母细胞中快速，高效而温和地抽提可溶性蛋白。采用试剂处理，可以避免激烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作用。使用方便，避免了重复性差的研磨法，超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏。本抽提试剂可用于提取啤酒酵母、裂殖酵母、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌及革兰氏阳性菌的蛋白抽提。与传统方法相比，处理得到的提取液中可溶蛋白产量大，活性高，提取快速；提取液可以直接用于Ni-NTA、GST等亲和纯化。酵母蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。

试剂盒组成：

组份	25次	100次
Yeast Protein Extraction Reagent	25ml	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	250μl	1ml

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、提取液中含有去污剂，不宜使用受去污剂干扰的蛋白定量方法。
2、为了获得实验最佳效果，请根据实验调整最佳使用量。

使用方法：
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Yeast Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、将酵母培养液3000×g，4℃，离心5分钟，收集菌体。
3、取适量Yeast Protein Extraction Reagent，抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail，即1×工作液。
4、每50 mg酵母加入500μl 1×工作液，涡旋振荡或上下吸打使酵母充分重悬。
5、将细胞悬液置于冰上，孵育20分钟(每间隔5分钟轻微摇晃一下)。
6、～13400×g离心10分钟。
7、转移上清至新管中，进行下一步的蛋白含量测定、纯化及分析。

储存条件：-20℃

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