Tris-甘氨酸蛋白电泳液(pH8.3, 10×)哪里买

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括Tris-甘*酸蛋白电泳液(pH8.3, 10×)哪里买在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：Tris-甘*酸蛋白电泳液(pH8.3, 10×)哪里买
品牌：百奥莱博
规格：500ml
编号：WE0283
英文名：Tris-Glycine SDS Buffer(pH8.3, 10×)

关于Tris-甘*酸蛋白电泳液(pH8.3, 10×)哪里买的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·口腔拭子DNA样本保存管
编号：WE0395
规格：200μl×10支
本产品采用医疗专用的聚*脂海绵为原材料，具有吸液性强、柔软洁净、发尘量低等优点。采样拭子头可折断，使用方便。采用的物料对微生物无毒害，能大量地增加样本的采集、释放量，增强样本送检期间的保存效果。能够常温保存口腔拭子DNA长达12个月，其获得的DNA可用来完成各种基因检测及分析实验，如qPCR、NGS、SNP分析。为运输和存储提供方便，并减低其成本。

使用方法
1、取样前清洁双手，用清水漱口1-2次，去除口腔中的食物残渣，咽尽口腔中剩余的清水。
2、撕开采样棉签外包装。
3、将棉签伸进口腔内，在内侧颊粘膜处反复擦拭20次以上，至棉头已经被唾液充分浸润(应无食物残渣等异物粘附)。
4、打开样本采集管盖，将采样后的棉签放入样本采集管内，沿手柄上的折痕折断手柄。
5、随即盖上样本采集管，完成样品取样。


·T4 DNA连接酶
编号：WE0239
英文名称：T4 DNA Ligase
规格：100U|500U
  T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接，还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接，以及线性DNA的自身环化。

产品组成：

 

组份	100U	500U
T4 DNA Ligase，5 U/μl	20μl	100μl
10×Ligation Buffer	150μl	750μl
50%PEG Solution	150μl	750μl

实验前准备及重要注意事项
1、T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。
2、PEG可以极大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3、为了提高转化效率，建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。

使用方法：

一、粘性末端的连接：

1、按以下体系配制反应液：

组份	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	0.2μl	1 U
ddH2O	补充至20μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：22℃孵育10分钟。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

二、平末端的连接：

1．反应体系：

组分	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
50%PEG Solution	2μl	5%
ddH2O	补充至20μl	20μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：22℃孵育1小时。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

三、线性DNA的自身环化：

1、反应体系：

组分	50μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	5-50ng
10×Ligation Buffer	5μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
ddH2O	补充至50μl	50μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：粘性末端22℃孵育10分钟；平末端22℃孵育1小时。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

储存条件：-20℃。


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·高效cDNA第一链合成试剂盒
编号：WE0131
英文名称：MMLV cDNA Synthesis Kit
规格：100次
  本试剂盒是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的cDNA第一链合成试剂盒。本产品包含从RNA模板逆转录成cDNA第一链所需的所有试剂，其中包括MMLV逆转录酶、反应缓冲液、引物、dNTP等。经过突变改造的MMLV逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解，更容易获得全长的cDNA。MMLV逆转录酶热稳定性强，可得高产量的cDNA，使用简单方便。本系统对后续的PCR以及定量PCR试验兼容性高，适用各种PCR反应的DNA聚合酶。

试剂盒组成：

组份	100次
MMLV，200 U/μl	100μl
5×RT Buffer	500μl
Primer Mix	240μl
dNTP Mix，2.5 mM Each	500μl
DTT，0.1 M	240μl
RNase-Free Water	1ml

产品特点
1、RNase H-：经突变的MMLV逆转录酶，RNase H活性缺失，更易获得全长cDNA。
2、使用方便：试剂盒包含除RNA模板外的逆转录所需全部试剂。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。

操作步骤：
注意：10ng-5μg总RNA可建立20μl反应体系，如果总RNA量大于5μg，请按比例扩大反应体系。

I．逆转录操作步骤：
1、将RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、MMLV和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为20μl。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	1ng-5μg
5×RT Buffer	4μl	1×
DTT，0.1 M	2μl	10 mM
MMLV，200 U/μl	1μl
RNase-Free Water	up to 20μl

注意：
1)若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4、42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
5、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。

II．若逆转录效率低，或RNA模板二级结构复杂、GC含量高时，建议采用以下步骤：
1、将RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、MMLV和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为13μl 。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	1ng-5μg
RNase-Free Water	up to 13μl

3、70℃孵育10分钟，迅速冰浴2分钟。
4、短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
5、继续向以上反应液中加入以下试剂：
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
5×RT Buffer	4μl	1×
DTT，0.1 M	2μl	10 mM
MMLV(200U/μl)	1μl

注意：
1)若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成。

6、轻轻吹打混匀，42℃孵育50分钟，85℃孵育5分钟。
7、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
8、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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·细胞核/浆蛋白抽提试剂盒
编号：WE0265
英文名称：Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞及组织的细胞核和细胞浆蛋白，所提取蛋白保持生物学活性。本试剂盒首先通过细胞浆蛋白抽提试剂裂解细胞膜，释放细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。抽提获得的核蛋白及浆蛋白纯度高，有效避免核/浆蛋白的交叉污染，可以用于Western、Gel Shift、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer A	50ml
Buffer B	3ml
Buffer C	25ml
Protease Inhibitor Cocktail	750μl

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：2～8℃

注意事项：
1、如需提取磷酸化蛋白请在抽提试剂中加入磷酸酶抑制剂。
2、所有样品操作请置于冰上进行。
3、可根据具体实验情况调整试剂用量，保证各试剂使用比例为Buffer A:Buffer B:Buffer C=100:5.5:50。
4、可以采用更高的速度来离心。

使用方法：

一、细胞中胞浆、胞核蛋白的提取
1、请在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer A和Buffer C进行预冷
2、收集细胞，计数。离心去上清。
3、1×107细胞中加入1ml Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育20分钟。
注意：各种细胞的特性不同，需要根据不同细胞的特性调整Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Buffer A及后续Buffer B、Buffer C的用量。
4、加入55μl Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育 1分钟。
5、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心 15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6、向上步所得的沉淀中加入500μl Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，每次约15-30秒。
7、4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。

二、组织中胞浆、胞核蛋白的提取
1、取材，保存组织。
2、在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer A和Buffer C进行预冷。
3、称组织重量，每100 mg组织中加入1ml Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail)，用匀浆器在冰上充分匀浆，放置在冰上孵育20分钟。
注意：各种组织的特性不同，需要根据不同组织调整Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Buffer A及后续Buffer B、Buffer C的用量。
4、加入55μl Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，放置在冰上孵育 1分钟。
5、4℃ 12000rpm离心 15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6、向上步所得的沉淀中加入500μl Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，每次约15-30秒。
7、4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。

储存条件：-20℃

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