罗丹明标记山羊抗小鼠IgG(H+L)现货

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括罗丹明标记山羊抗小鼠IgG(H+L)现货在内的一系列抗体抗原产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：罗丹明标记山羊抗小鼠IgG(H+L)现货
品牌：百奥莱博
规格：100μl
英文名：Goat Anti-Mouse IgG, TRITC Conjugated
产地：国产|进口
本产品为TRITC标记的经抗原亲和纯化的山羊抗体，特异识别小鼠IgG重链和轻链。使用本产品检测灵敏度高，本底低，稳定性好。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学的研究。TRITC(四甲基异硫*酸罗丹明)为罗丹明的衍生物，激发后呈现明亮的橙红色荧光。与FITC的黄绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。

免疫原：小鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：TRITC，Amax=550; Emax=570
应用范围：对于大多数实验(1：25-100)

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·酵母质粒提取试剂盒
编号：WE0165
英文名称：Yeast Plasmid Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒在普通碱裂解法的基础上进行了改进，全新的Lyticase可以有效的破除酵母细胞壁，新型硅基质膜和缓冲液系统能高效专一的结合质粒DNA，同时可以最大限度的去除蛋白及其他杂质，整个过程方便快捷，不需使用有毒有害试剂，可以同时处理多个样品。除适用于酵母细胞外，也可用于大肠杆菌。使用本试剂盒提取的质粒DNA可用于各种分子生物学实验，如连接、转化、测序和文库筛选等。

试剂盒组成：

 

组份	50次
Buffer P1	15ml
Buffer P2	15ml
Buffer N3	20ml
Buffer PS	15ml
Buffer PB	10ml
Buffer PW(浓缩液)	10ml
Buffer EB	10ml
RNase A(10 mg/ml)	150μl
玻璃珠	2g
吸附柱DM及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇，异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer P2、Buffer N3是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、注意不要直接接触Buffer P2和Buffer N3，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取的质粒量与酵母菌株、质粒拷贝数、培养条件等因素有关，通常酵母质粒拷贝数都很低，通过电泳或分光光度计法都很难检测到。

操作步骤：
1、取1-5ml酵母培养物(最多不超过5×107个酵母细胞，一般对于酿酒酵母OD600=1.0时，相当于1-2×107细胞/ml)加入离心管(自备)中，12000rpm(~～13400×g)离心30秒，收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
2、向菌体中加入250μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，重悬沉淀。
3、在以上混合物中加入40 mg的玻璃珠(Glass Beads)，涡旋震荡10分钟。
4、向离心管中加入250μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀6-8次，室温放置5-10分钟，此时菌液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
5、向离心管中加入350μl Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀6-8次，此时出现白色絮状沉淀，12000rpm离心20分钟。
注意：Buffer N3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
6、柱平衡: 向已装入收集管的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5所得上清加入到已装入收集管的吸附柱中，注意不要吸出沉淀。
注意：吸附柱的最大容积为750μl，溶液分2次过柱。
8、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
9、向吸附柱加入150μl Buffer PB，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
11、将吸附柱重新放回收收集管中，12000rpm离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100μl Buffer EB，室温放置数分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置数分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Buffer EB在65-70℃水浴预热，可以增加提取效率。
3)通常酵母质粒拷贝数很低，通过电泳或者分光光度计法都很难检测到。提取的质粒如果用于下一步实验，通常建议使用量为：用作PCR模板可使用1–5μl质粒，用于转化大肠杆菌可使用5–10μl质粒。
4)转化大肠杆菌时应使用商业化高转化效率的感受态细胞。

储存条件：室温(15～30℃)


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·SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)
编号：WE0287
英文名称：SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)
规格：500ml
  本产品为配制SDS-PAGE分离胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷。产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。

操作步骤：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。

I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可)， 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
5、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入10%过硫*(代"酸")铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6、静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。

附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围

SDS-PAGE 分离胶浓度	最佳分离范围
6%胶	50-150 kD
8%胶	30-90 kD
10%胶	20-80 kD
12%胶	12-60 kD
15%胶	10-40 kD

附表2. 配制SDS-PAGE分离胶

分离胶浓度	凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
		纯水	30%Acr-Bis(29:1)	分离胶缓冲液(4×)	10%APS	TEMED
6%	5ml	2.75	1.0	1.25	0.05	0.004
	10ml	5.5	2.0	2.5	0.1	0.008
	15ml	8.25	3.0	3.75	0.15	0.012
	20ml	11	4.0	5	0.2	0.016
8%	5ml	2.42	1.33	1.25	0.05	0.003
	10ml	4.8	2.7	2.5	0.1	0.006
	15ml	7.25	4.0	3.75	0.15	0.009
	20ml	9.7	5.3	5	0.2	0.012
10%	5ml	2.08	1.67	1.25	0.05	0.002
	10ml	4.17	3.33	2.5	0.1	0.004
	15ml	6.25	5.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	8.3	6.7	5	0.2	0.008
12%	5ml	1.75	2.0	1.25	0.05	0.002
	10ml	3.5	4.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	5.25	6.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	7.0	8.0	5	0.2	0.008
15%	5ml	1.25	2.5	1.25	0.05	0.002
	10ml	2.5	5.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	3.75	7.5	3.75	0.15	0.006
	20ml	5	10.0	5	0.2	0.008

附表3. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶

凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
	纯水	30%Acr-Bis(29:1)	浓缩胶缓冲液(4×)	10%APS	TEMED
2ml	1.14	0.34	0.5	0.02	0.002
4ml	2.28	0.68	1	0.04	0.004
6ml	3.42	1.02	1.5	0.06	0.006
8ml	4.56	1.36	2	0.08	0.008

储存条件：2～8℃


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·DNA文库定量试剂盒(Illumina平台)
编号：WE0231
英文名称：NGS Library Quantification Kit for Illumina
规格：1ml|5ml
  本产品是采用染料法(SYBR Green I)对NGS建库后的产物进行实时荧光定量PCR(qPCR)。试剂盒提供了qPCR过程所需的反应混合液，DNA引物混合物，标准品，试剂体系完整，操作简单方便。本试剂盒使用的是一种经化学修饰的全新高效热启动聚合酶，酶的激活需在95℃下孵育10 min。该产品特异性强，扩增效率高，能够对构建的文库浓度进行快速准确的定量。适用于无需ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪，如Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-radiCyleriQ，iQ5，CFX96。
  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
  不需要ROX校正的仪器： Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-radiCyler iQ，iQ5，CFX96等。
  需要Low ROX校正的仪器： ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System， QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system， Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
  需要High ROX校正的仪器： ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

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