WE0145型实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(低含量

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括WE0145型实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(低含量ROX校正染料)厂家在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：WE0145型实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(低含量ROX校正染料)厂家
规格：5ml
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含BaldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP基因型分析等，适用于不同类型探针法荧光定量。本品含有的BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免了在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，可以检测单拷贝的模板。使用本产品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。适用于无需ROX作为校正染料的所有荧光定量PCR仪。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0144)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0145)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0146)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

 

组份	WE0144-5ml	WE0145-5ml	WE0146-5ml
2×BaldStar TaqMan Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1．使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2．避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaldStar Taq Man Mixture	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序：
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

两步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

关于WE0145型实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(低含量ROX校正染料)厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·Western Ladder笔
编号：WE0294
英*(代"文")名称：Western Blot Ladder Pen
规格：1000次
  蛋白免疫印迹(WB)是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，经常用于检测抗体和抗原之间的特异性，而且能够对目的蛋白进行定性或定量分析研究。但是在试验中，抗原或者抗体往往都不是单一的成分，这些可能会导致在最终底片曝光出多条条带，或出现一些不明分子量的条带，或者目的条带的位置都不能确定。因此确定这些条带的分子量对我们进行下一步的分析就显得非常重要。
  目前，市场上有一些预染Marker，能很好监测我们的转膜效率，电泳转膜后能在杂交膜上看到Marker相应的条带，但是这些Marker 最终不能在底片上曝出条带。
  Western Blot Ladder Pen 正是要为您解决这个问题，通过转膜后对着预染Marker或经过丽春红染色确定的非预染Marker的各条带进行相应的标记，最终这些笔迹都能在目的位置曝光出相应的条带，用作分子量标准。同时也可以用它在膜上做其它标记，或者用作阳性对照。

注意事项：
1、本产品适用于HRP底物系统。
2、WB Ladder Pen使用完成后，请水平放置于2～8℃，请勿冻存于-20℃。
3、使用前请先将WB Ladder Pen在纸上画几笔之后再在膜上做相应的标记。
4、标记过程中请勿用力太大，以免破坏膜的结构，轻划即可。
5、随着笔使用时间的增加，信号可能会逐渐减弱。

操作步骤：

1、电泳的过程中，可以使用预染蛋白Marker或者非预染蛋白Marker。
2、常规的转膜后，将膜取下。
a. 使用预染蛋白Marker的NC膜：去离子水漂洗膜后，使用上下两层滤纸或者卫生 纸吸掉膜上多余的液体(请勿将膜吸的过干)。
b. 使用非预染蛋白Marker的NC膜：丽春红染膜后，用铅笔将非预染蛋白Marker的 各个条带标记。TBST漂洗膜，以完全去掉膜上的丽春红，使用上下两层滤纸或者 卫生纸吸掉膜上多余的液体(请勿将膜吸的过干)。
3、使用WB Ladder Pen在膜上做好相应的标记(轻划即可)，放置15秒之后将膜放置 于封闭液中封闭。
4、按常规步骤进行后续的WB试验。

储存条件：2～8℃


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·DNA文库定量试剂盒(Illumina平台)
编号：WE0231
英*(代"文")名称：NGS Library Quantification Kit for Illumina
规格：1ml|5ml
  本产品是采用染料法(SYBR Green I)对NGS建库后的产物进行实时荧光定量PCR(qPCR)。试剂盒提供了qPCR过程所需的反应混合液，DNA引物混合物，标准品，试剂体系完整，操作简单方便。本试剂盒使用的是一种经化学修饰的全新高效热启动聚合酶，酶的激活需在95℃下孵育10 min。该产品特异性强，扩增效率高，能够对构建的文库浓度进行快速准确的定量。适用于无需ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪，如Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-radiCyleriQ，iQ5，CFX96。
  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
  不需要ROX校正的仪器： Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-radiCyler iQ，iQ5，CFX96等。
  需要Low ROX校正的仪器： ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System， QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system， Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
  需要High ROX校正的仪器： ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。


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·罗丹明山羊抗大鼠IgG(H+L)
编号：WE0374
英*(代"文")名称：Goat Anti-Rat IgG, TRITC Conjugated
规格：100μl
本产品为TRITC标记的经抗原亲和纯化的山羊抗体，特异识别大鼠IgG重链和轻链，检测灵敏度高，本底低，稳定性好。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学的研究。TRITC(四甲基异硫*酸罗丹明)为罗丹明的衍生物，与FITC的黄绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。

免疫原：大鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：TRITC，Amax=550; Emax=570
应用范围：对于大多数实验(1：25-100)

·TOP10感受态细胞
编号：WE0251
英*(代"文")名称：TOP10 Competent Cell
规格：100μl×10支
  本产品是大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。TOP10是一种常用于质粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶*基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

产品组成：

组份	0.1ml×10支
TOP10 Competent Cell	10×100μl
Control DNA pUC19，0.1ng/μl	10μl

实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

使用方法：
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意：
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

储存条件：-80℃。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购WE0145型实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(低含量ROX校正染料)厂家。