植物叶绿体蛋白提取试剂盒库存

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名称：植物叶绿体蛋白提取试剂盒库存
规格：15次
产地：国产|进口
编号：BTN130887
品牌：百奥莱博
本试剂盒是结合植物叶绿体纯化试剂盒和细菌蛋白质提取试剂盒而推出的新兴产品，专门用于植物叶绿体蛋白的快速提取。

产品特点：
1. 即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。
2. 本产品足够15次提取，每次可处理30g叶片。
3. 得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D电泳、免疫印迹分析、蛋白活性测定和BCA法及Lowry法蛋白定量(不适用于Bradford法)。
4. 已经成功用于菠菜、大豆、莴笋、白菜、烟草和甜菜等植物，还可用于更多植物(可能需要优化条件)。

试剂盒组成：

 

成份	规格
匀浆液成分一	250mL×2
匀浆液成分二(干粉)	3g
Percoll	60mL
带柄尼龙滤膜	1个
植物叶绿体纯化试剂盒	15次
溶液A	15mL
溶液B	1.5mL
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：叶绿体对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行，所用器皿和溶液均需要在4℃预冷。离心时一定要在4℃进行，离心力以g而不是rpm计算。如果需要研究叶绿体的功能，提取还需要在昏暗的光线条件下进行。

一：叶绿体的纯化
1. 实验前1-2天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成，否则离心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净，再用蒸馏水淋洗，去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理，则保存时需要保持叶片湿润，即使如此，叶片的放置时间也不能超过一天。
2. 新鲜(实验当天)制备匀浆液：将自备的去离子水与匀浆液成分一按4：1的比例混合，然后在混合液中加入匀浆液成分二干粉到终浓度0.1%(每100mL中加入0.1 g干粉)，摇晃溶解后所得溶液即为匀浆液，冰上预冷待用。一次实验(从30 g叶片提取叶绿体)所需要的匀浆液体积跟材料不同而不同。
3. 新鲜采集植物叶片，快速去除叶脉并将叶片剪成1-3 cm2大小的碎片并浸泡在适量的预冷的匀浆液中(每克叶片加4mL匀浆液，但对烟草和大豆，每克叶片需要加6mL匀浆液)。
4. 将浸泡了叶片的匀浆液转移到Waring匀浆机(即家用制备果汁的匀浆机)中，低速匀浆10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入匀浆机底部后，再低速匀浆10秒。注意：除Waring匀浆机外，还可以选择Dounce玻璃匀浆器，Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等裂解细胞的方法，但这些方法的单次处理量都比较小，需分成很多小份单独匀浆，然后再汇集。
5. 用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液，可先将滤液收集到预冷的200mL量筒中，再等分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个管中的滤液不要超过35mL)。带柄尼龙滤膜后可反复使用。
6.在水平转子离心机上4℃ 200 g离心3分钟(对菠菜，白菜和莴笋材料)或400 g离心1分钟(对甜菜材料)，白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。
7. 将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的50mL塑料离心管中。
8.在水平转子离心机上4℃ 1000 g离心7分钟，小心弃上清，沉淀含叶绿体，呈浅绿色。
9.在沉淀中加入1.5mL预冷的匀浆液，手弹离心管底部使叶绿体重悬。注意：重悬时最好避免溶液起泡，也不要用枪头吹打，否则叶绿体容易破裂。沉淀下有白色淀粉属于正常现象，但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。
10. 将4管叶绿体重悬液汇集(共约6mL)，得到叶绿体粗提液，可直接用于后续的SDS-PAGE，Western，ELISA和蛋白组分析。
11. 如果需要以之为材料精提叶绿体，就需要用密度梯度离心法将完整的叶绿体和其他污染物进一步分离。具体操作步骤是：在50mL塑料离心管中先加入6mL匀浆液成分一和4mL Percoll，充分混合均匀。在其液面上小心铺上叶绿体粗提液。在水平转子离心机上4℃ 1000 g离心8分钟，管底绿色沉淀为完整的叶绿体。小心将上清倒出后，用于叶绿体蛋白提取。

二：叶绿体蛋白质的提取
12. 将1mL的溶液A和100μL溶液B加入到叶绿体沉淀(约15mg湿重)中，吹打混匀。
13. 冰上放置30分钟至1小时至溶液变清。
14. 4℃ 1,2000 g离心1分钟。
15. 将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分样品到离心管中，加入5×SDS-PAGE上样缓冲液(终浓度为1×)，在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。

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甲氧苄啶 Pectinase 738-70-5
植物叶绿体蛋白提取试剂盒库存关键词：Plant Chloroplast Protein Extraction Kit ,BTN130887,植物叶绿体蛋白提取试剂盒


·随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒
编号：BTN90603B
英文名称：Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin)
规格：5次
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒，标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示：

本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。

产品特点：
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速，最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素，可以达到109cpm/μg DNA)，检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的，长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间，可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择，其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记，但需自备标记底物；BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记，不需自备标记底物。

试剂盒组成：

成分	规格
2×A型标记反应液(自备标记物型)	50μl(仅A型有)
2×B型标记反应液(生物素型)	50μl(仅B型有)
2×C型标记反应液(DIG型)	50μl(仅C型有)
dATP,2mM	10μL(仅A型有)
dTTP,2mM	10μL(仅A型有)
dGTP,2mM	10μL(仅A型有)
dCTP,2mM	10μL(仅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×标记反应液(ABC三种之一)	10μl
超纯水	补水到15μl

注意：非同位素标记物由于疏水性强，容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合，所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好，因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交，竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟，或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性，立即放冰上待用。注意：如果PCR仪器不能设置到100℃，99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底，根据试剂盒类型加入下列成份：

试剂盒类型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水

注：上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM，dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍，并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高，一般dTTP与标记dUTP的比例在65：35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP，则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例，如果使用32P标记的dUTP，则比活最好为3000Ci/mmol，浓度为好为10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关，具体见下表：

模版DNA用量	1小时后探针合成量	20小时后探针合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链，然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。
 注意：本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针，因为这些标记分子疏水性强，能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针，由于其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。


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