369-07-3型ONPG溶液(10mg/mL)厂家

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百奥莱博专业生产销*(代"售")369-07-3型ONPG溶液(10mg/mL)厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：369-07-3型ONPG溶液(10mg/mL)厂家
英文名：O-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside Solution
品牌：百奥莱博
规格：10mL
产地：国产|进口
编号：BTN131185
本产品为即用型ONPG溶液，可直接用作β-半乳糖苷酶检测试剂盒的底物使用。ONPG即邻硝基*(代"*")β-D-半乳吡喃糖苷，分子量301.25，CAS是369-07-3，它是β-半乳糖苷酶的底物，其可被β-半乳糖苷酶水解为半乳糖和黄色的邻-硝基*(代"*")酚(ONP)，因此可以通过培养液颜色的变化测知β-半乳糖苷酶的活性。

储存条件：低温运输，-20℃干燥避光保存，有效期一年。

关于369-07-3型ONPG溶液(10mg/mL)厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒
编号：BTN130597
英文名称：Firefly Luciferase Assay Kit
规格：100次
本试剂盒采用通用裂解缓冲液，能与其他类型的报告基因检测和蛋白含量检测兼容。本产品与海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒共同使用，可进行一体化的双荧光素酶检测。

报告基因检测是真核基因表达调控研究的常用方法。因为检测光量子的方法非常敏感，所以生物发光法是报告基因检测最常用的手段。荧光素酶(luciferase)催化底物荧光素的转化，发射出光子。萤火虫荧光素酶催化的发光反应，具有很好的浓度线性范围(7~8个数量级的线性范围)，酶的检测灵敏度达到10⁻²ºmol。原理如下：


试剂盒特点：
1．高度灵敏：可检测10⁻¹⁸～10⁻²ºmol荧光素酶。
2．线性范围宽：线性范围达到7~8个数量级。
3．快速简便：特别适合于高通量筛选。
4．兼容性好：与其它常用报告基因检测试剂兼容。
5．本产品可足够100次荧光素酶检测。

试剂盒组成：

 

成分	规格
5×Universal Lysis Buffer (通用裂解缓冲液)	20mL
Fassay Buffer	10mL
Fassay Substrate(底物)	0.5mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃或-80℃避光保存，有效期半年。

使用方法：

★裂解细胞：
1. 配制裂解液：临用前，取适量5×Universal Lysis Buffer(ULB)，用双蒸水稀释至1×ULB，混匀。1×ULB可在4℃存放数周。
2. 清洗细胞：倾去培养板/皿中的培养液，加入足量PBS ，轻轻洗涤细胞。完全倾去洗涤液。
3. 裂解细胞：按照下表中推荐的体积，在孔/皿中加入1×ULB ，混匀。培养板可在微型振荡器上震荡5-10分钟；培养皿可直接用细胞刮刀刮下细胞，将细胞悬液移入1.5mL离心管，在涡旋振荡器上充分混悬震荡30秒。裂解细胞悬液可直接用于发光测定，也可离心30秒，取上清液做发光测定。
表：不同孔/皿所需1×ULB体积

96孔板	48孔板	24孔板	12孔板	6孔板	35mm平皿	60mm平皿
50μL	80μL	150μL	250μL	500μL	500μL	1000μL

★配制发光反应液：
测定前，室温溶化Fassay Buffer和Fassay Substrate，混匀。按20/1比例用Fassay Buffer稀释Fassay Substrate，配制所需体积的Fassay Reagent(注意避光)。
★测定仪器的设置：
按仪器操作说明开启发光测定仪。手动操作型仪器，将测读时间设为10~20秒。自动操作型仪器，一般将测定延迟设为2秒，将测读时间设为10~20秒，Fassay Reagent的注入体积设定为100μL。
★手动发光测定：
取待测样品20μl加入测量管底部，取Fassay Reagent 100μL立即加入管底部，轻轻敲击管壁3~5次混匀，放入仪器中立即测定，记录发光值为Firefly luciferase的发光单位(RLU)。如用多孔板同时手动测定多个样品，则将各待测样品20μL分别加入连续的各孔底部，用多道加样器于各孔底加入Fassay Reagent 100μL，轻轻敲击板侧3~5次混匀，放入仪器中立即测定，记录发光值为Firefly luciferase的发光单位(RLU)。
★自动发光测定：
配制好的Fassay Reagent置于测定仪内并连接好对应管道。取待测样品20μL分别加入测定管/板孔底部，启动自动测量程序。记录Firefly luciferase的发光单位(RLU)。

注意事项：
1．Fassay Substrate(底物)溶液应密封、盖严存放，避免蒸发。Fassay Buffer和Fassay Substrate(底物)应避免反复冻熔，可分装成合适体积分次使用。
2．1×细胞裂解液一般在当天测定。如需隔日测定，应将样品于-20℃保存。长期保存应在-80℃。
3．用多孔板同时手动测定多个样品时，要尽量缩短样品间试剂加入的时间间隔。
4．本产品与海肾荧光素酶活性检测试剂盒联合使用，可进行一体化的双荧光素酶检测。


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·去离子水
编号：BTN81209
英文名称：Deionized water
规格：250mL

·酿酒酵母Y2HGold化学感受态细胞
编号：BTN140390
英文名称：E.coli Y2HGold Chemical Competent Cell
规格：10×100μL
 酿酒酵母Y2HGold是Clontech公司开发的GAL4系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187 通过mating 操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker 为：trp1，leu2，报告基因为：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1。

 Y2HGold-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：pGBKT7和pGADT7。质粒pGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端1~174 位*基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒pGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C 端768 ~881 位*基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。

 GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N端1~174位*基酸区段的DNA结合域(DNA-BD)和位于C端768~881 位*基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成bait融合蛋白(bait-BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果bait和prey发生相互作用，就会促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。Y2HGold有四个报告基因：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1，分别由三种不同的启动子(G1，G2，M1)启动，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。此外新报告基因AbAr与以前的营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点，也可以降低酵母双杂假阳性发生的概率。

 Y2HGold感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。

Y2Hgold的基因型是：MATa，trp1-901，leu2-3，112，ura3-52，his3-200，gal4Δ,gal80Δ，LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3，GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2URA3::MEL1UAS-Mel1TATA AUR1-C MEL1

产品组成：

成分	规格
Y2Hgold感受态细胞	0.1ml×10支
PGADT7，10 ng/μL	10μl
Carrier DNA，5μg/μL	100μl
PEG/LiAc	5ml
说明书	1份

储存条件：感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/LiAc 4℃保存；有效期半年。

自备试剂：目的DNA、YPDA、 SD培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中依次加入2-5μg预冷的目的质粒、10μLCarrier DNA(95-100℃ 5分钟，快速冰浴，重复一次)、500μl PEG/LiAc，吹打混匀，30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6-8次混匀)。
3. 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6-8次混匀)。
4. 5000rpm离心 40秒，弃上清。取400μl ddH2O 重悬沉淀，5000rpm离心 30秒，弃上清。
5. 取50μl ddH2O 重悬沉淀，涂板，29℃培养48-96小时。

注意事项：
1. 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
2.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P - ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
3. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA 平板29℃，48h培养可见直径1mm 克隆；涂SD 单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 三缺或四缺平板29℃，80-90h培养可见直径1mm 克隆。
4.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
5. 同时转化2-3 种质粒时可增加质粒的用量。


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·酵母电转感受态细胞制备液
编号：BTN81201
英文名称：Yeast Electro Competent Cell Preparation Kit
规格：20次
本酵母电感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理酿酒酵母和裂殖酵母电感受态细胞，使之不但马上能用于电转化，还能长期放置后用于电转化。

产品特点：
1. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要10余分钟。
2. 制备得到的感受态细胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。
3. 主要用于酿酒酵母S.cerevisia和S.pombe，但能否用于其他酵母(如C.albicans、Pichia pastoris等)不详。
4. 最高转化效率可达到0.2-1×106个转化子/ug质粒DNA。
5. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。
6.可以用于酵母双杂交、定点突变、基因破坏、等位突变基因修复等实验。
7. 本试剂盒足够处理200mL酵母菌液，制备40管酵母感受态细胞。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂：
灭菌水，SD液体培养基(不含*基酸的0.67% Bacto Yeast Nitrogen Base，2%葡萄糖)，SD固体培养基(在SD液体培养基中再加2%琼脂)，YPD液体培养基(1% Bacto Yeast Extract，2% Bacto Peptone，2%葡萄糖)，YPD固体培养基(在YPD液体培养基中再加2%琼脂)

使用方法：

一：电感受态细胞的制备
 说明：按本方法制备1 管酵母电感受态细胞就需要OD600达到1.0的新鲜酵母培养液5mL，用户需根据制备的酵母感受态细胞数量决定培养细胞的体积。下面操作只是以10mL酵母为例说明。
1.培养S.pombe细胞：挑取新鲜单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到10mL SD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右(相当于1×107细胞/mL)。
2.培养S.cerevisiae细胞：挑取新鲜单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到装在10mL YPD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右(相当于1×107细胞/mL)。
3. 冰上放置15分钟。
4.室温1600rpm离心5 min，弃上清。
5. 用冰浴的灭菌水洗涤3次。
6. 用0.2mL冰浴的本产品重悬细胞。
7. 按每管0.1mL分装到1.5-2mL的冷冻管中，直接放入-80℃冰箱待用。
 注意：不能放在液氮中，否则将丧失电转化能力。

二：电转化酵母感受态细胞
1. 将装有0.1mL感受态细胞的冷冻管从冰箱取出的、放置在30℃水浴中快速化冻(快速化冻的效果好于缓慢化冻)。
2. 用1mL冰浴的本产品洗涤一次。
3. 加入50μL冰浴的本产品重悬细胞。
4. 加入1-30 ng质粒DNA 并轻柔混匀。
5.转移到预冷的、距离为0.2cm的电击杯中。
6. 按电击仪的手册设置电击参数并进行电击处理，参考条件为：10kV/cm(对0.2 cm的电击杯，则为2kV)，5ms(25F，200)(各厂家仪器的使用略有不同，请严格按电击仪厂家提供的手册进行操作)。
7.电击后将细胞转移到1mL预冷的本产品中，轻柔混匀。
8. 取0.2mL转化细胞涂盘(S.pombe细胞需涂盘在SD 固体培养基上，S.cerevisiae细胞需涂盘在YPD固体培养基上)，30℃培养4-6天。

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