北京现货DNA磷酸化试剂盒促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应北京现货DNA磷酸化试剂盒促销，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京现货DNA磷酸化试剂盒促销
编号：BTN130813
品牌：百奥莱博
规格：20次
产地：国产|进口
英文名：DNA Phosphorylation Kit
人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5´端一般都是-OH基团而不是-PO4基团(除非额外付费要求在人工合成时加上-PO4基团)，而任何DNA连接酶都不能将一个DNA分子5´端的-OH基团和另一个DNA分子3´端的-OH基团进行连接，因此通过人工合成的DNA片段和天然DNA 之间的连接效率一般都比天然DNA 彼此的连接效率低(天然DNA 4个端口均可连接，人工合成的DNA跟天然DNA 有2个端口可以连接，人工合成的DNA之间没有任何端口可以连接)，尤其是在平末端连接时。本公司开发的DNA 磷酸化产品能将DNA分子5´端的-OH基团磷酸化。

产品特点：
1.可以快速把DNA的5´端的-OH基团变成-PO4基团，使人工合成的DNA(包括PCR产物)跟天然DNA一样有高的连接效率。
2. 既可以对单链DNA进行磷酸化处理，也可以对双链DNA片段同时磷酸化处理。
3.处理后的DNA可以直接用于连接反应、克隆等，不需要纯化。
4. 本产品足够20次DNA的磷酸化实验。

成分	规格
10×TPK缓冲液	50μl
ATP溶液(10mM)	100μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为6个月。

使用方法：

一：双链DNA片段(5´端为-OH基团的)的磷酸化
注意：如果是PCR产物，一定要先胶回收，不能使用没经过纯化的PCR反应液，因为其中的残留PCR引物会耗掉大量的激酶，降低PCR产物的磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液(20μL)：

成分	用量
PCR胶回收片段	2μL(不超过10pmol)
10×TPK缓冲液	2μl
ATP溶液(10mM)	5μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超纯水到	20μl

2、37℃反应30分钟。
3、70℃热处理5分钟，灭活酶。
4、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。

二：单链DNA片段的磷酸化
注：单链DNA 包括局部双链的DNA。引物，linker，adaptor，Oligo探针等均按此操作处理。
5、在微量离心管中配制下列反应液(20μL)：

成分	用量
单链DNA片段	5-10 pmol
10×TPK缓冲液	2μl
ATP溶液(10mM)	1μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超纯水到	20μl

6、37℃反应30分钟。
7、70℃热处理5分钟，灭活激酶。
8、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。如果使用浓度高，则可能需要乙醇沉淀法浓缩DNA。如果单链DNA的浓度低于5pmol，还需要在乙醇沉淀时加入核酸助沉剂。沉淀得到的DNA可溶解在适量的水中。

附：乙醇沉淀浓度DNA(本试剂盒不提供相关试剂，下列操作仅供参考：
1、在DNA溶液中加入0.1倍体积的3 M 乙酸*溶液(pH5.2)。
2、再加入2.5倍体积的无水乙醇和4uL 核酸助沉剂。
3、混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
4、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
5、短暂离心5秒，吸弃残留液体(约30-50μL)。
6、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。

想要了解更多关于北京现货DNA磷酸化试剂盒促销的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联*(代"系")。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：

·大肠杆菌TG1化学感受态细胞
编号：BTN80701
英文名称：E.coli TG1 Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达108。本产品为dam-，dcm-的菌株，能够排除dam，dcm甲基化的影响。

菌株基因型：sup E hsd Δ5 thi Δ(lad-pro AB)F+[tra D36 pro AB+lacIQlacZΔM15]

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可根据实际情况使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μL 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。


北京现货DNA磷酸化试剂盒促销关键词：BTN130813,DNA Phosphorylation Kit,DNA磷酸化试剂盒

维生素K4 INT 573-20-6
ARB11998 大鼠P物质受体(SP-R)酶标法分析 Rat substance p receptor,sp-r ELISA KIT
14306-25-3 Phytic acid sodiu*(代"m") salt hydrate 植酸*
硫代乙醇酸* D-Tryptophanol 367-51-1
PY02-110  匹克氏肉汤基础A  250克  
马铃薯浸出粉 VAZO64
三(2-羧乙基)膦盐*(代"酸")盐 Glutathione Reductase from baker"s yeast 51805-45-9
黄嘌呤氧化酶 Sodium 1,5-naphthalenedisulfonate dibasic 9002-17-9
Tris-甘*酸电泳缓冲液(10×)   500ml
BL0893 FITC标记羊抗人IgG抗体
ARB13848 猪内皮型一氧化*(代"氮")合成酶(eNOS)Elisa分析 Porcine endothelial nitric oxide synthase,enos ELISA KIT
细菌外膜蛋白提取试剂盒 Bacterial outer membrane protein extraction kit  50T|100T
ARB11655 人蛋白聚糖(PG)酶联免疫定量检测 Human proteoglycan,pg ELISA KIT
50-01-1 盐*(代"酸")胍 Guanidine HCl
结晶碳酸* Michler"s ketone 6381-79-9
BTN131005 cDNA第二链合成试剂盒 Second Strand cDNA Synthesis Kit
北京现货DNA磷酸化试剂盒促销关键词：BTN130813,DNA Phosphorylation Kit,DNA磷酸化试剂盒


·植物RNA提取试剂盒
编号：BTN3080
英文名称：Plant RNA extraction kit
规格：50次
本试剂盒是我们公司自主开发的独特产品，其原理完全不同于异硫*酸胍/酚/*仿提取方法，克服了后者不能区分RNA(本质上是多糖)和其他植物多糖的缺点，能高效将RNA和其他植物多糖分开，同时还能有效去除多酚和其他植物次级代谢成份。其有效性在近五十多种各类植物(见附录，包括十分棘手的松柏类植物)中得到验证。

试剂盒特点：
1.适用于绝大多数植物，从五十多种植物材料中都成功提取到了总RNA，其中包括松针、柏树、香蕉等用胍/酚/*仿方法未能提取到RNA的植物(注：部分植物组织，如果实，RNase含量极高，需要另外加RVC抑制其活性)。
2. 操作简单快速，最短可以只需要约十五分钟，可以全在室温下进行。
3. 得到的RNA平均 OD260/280在1.9左右，可直接用于RT-PCR和Northern等研究。

试剂盒组成：

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	25ml
溶液D	25ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1、准备
a)估算试剂和组织细胞的用量并准备足够的*仿、75%乙醇和RNA溶解液(如RNApreserve、无RNase的水或有灭活残留RNase活性的液相RNase清除剂)。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
b)溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解。
2、匀浆
a)先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒，将不超过1mL的匀浆液转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。有的植物组织(果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
b)如果用砚磨法破碎植物组织，需将植物组织浸泡在1mL溶液A中再砚磨，尽量避免植物组织跟空气直接接触，然后将砚磨物转移到新的1.5mL离心管中。
3、第一次分相
a)在装有裂解物的离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
b)室温12000～15000g离心5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
c)将上清液(约0.8mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
4、第二次分相
a)在上清液中加入0.5mL的溶液C和0.2mL的自备*仿，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
b)室温12000～15000g离心3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
c)将上清液(约1mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
5、沉淀
a)在上清液中加入0.5倍体积的溶液D，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈白色浑浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。如果提取 50mg以下的微量植物组织样品，最好在此步加入我们公司的微量助沉剂RNApp。
b)室温12000～15000g离心3～5分钟，RNA将在管底形成白色沉淀(约黄豆大小)。如果组织样品量少或需要提高RNA回收率，也可以延长离心时间到20-30分钟。
c)小心移弃上清液，避免触及管底RNA沉淀。
注意：如果加入溶液D离心后沉淀漂浮在上面，说明植物糖份多，溶液比重大，可以少加植物样品，也可以适当加无RNase的水稀释直到沉淀能够沉下去为止。如果离心后管底有类似*仿的相出现，说明上一步离心时间不够或取上清时取到了下层的有机相，可以适当延长离心时间或取上清时留下约100μl不取或在第四步时加0.3mL的自备*仿。
6、第一次清洗
a)在离心管中加入1mL 75%的乙醇，振荡器上振荡混均30秒。
b)室温12000～15000g离心1分钟，RNA将在管底形成细小沉淀(约芝麻大小)。
c)小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
7、第二次清洗
a)重复第六步一次。
b)短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液,注意不要吸弃沉淀。此步将有效去除残留的乙醇，否则后续反应会受到影响。
8、溶解
a)加入适量(一般为20-100μl)RNA溶解液使RNA沉淀溶解，存放于-80℃或立即使用。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则RNA将变得十分难溶。
9、检测
a)RNA完整性的电泳检测
如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或我们公司的SuperBuffer-2 DNA/RNA两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以最好不要使用。
尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也会参与此反应，使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
由于动物细胞中70-80%的RNA为rRNA，后者又由28S(约4800nt)，18S(约1900nt)和5.8S(约120nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强)，所以28S rRNA条带的荧光强度一般比18S rRNA条带的荧光强度强1.5-2.3倍。如果这两条rRNA带不清晰或比例小于此范围则表示RNA有降解(因为大的RNA被酶降解的可能更大)。
跟动物一样，植物果实和种子的RNA一般有三条电泳带，但植物叶片的RNA有四条或更多rRNA带，多余的RNA来源于叶片中大量存在的叶绿体。
b)RNA产量产率测定
将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%，因为核酸光吸收跟溶液pH相关，而DEPC水中的DEPC高压分解后产生的CO2与水反应生成碳酸，使溶液pH降低进而降低RNA的光吸收。RNA的产率还随组织的营养状态和组织的种类不同而不同，100mg种子的RNA产量一般为100-120μg，100mg叶片为30-60μg，100mg果实为20-40μg。
c)RNA纯度测定
无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用我们公司的DNA Scavenger和PS Scavenger去除。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，我们公司初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用我们公司优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2,最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
Q：为何提取的RNA电泳时带型不清楚或根本没有条带？
A：可能原因：
  1、电泳没有使用MOPS缓冲液+甲醛变性胶；
  2、没有使用RNA专用的上样液或使用的RNA专用的上样液放置时间过长；
  3、植物组织样品中RNase很多，可以使用RVC(部分植物果实需要此处理)；
  4、植物组织中含多酚等影响提取的物质(如松柏等植物)，可以在溶液A中加入终浓度为0.1 M的硼*化*。

我公司正在优惠促销克隆与表达等系列产品，期待您的咨询选购北京现货DNA磷酸化试剂盒促销。