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DNA Shuffling Kit
一年
北京百奥莱博科技有限公司
低温运输,-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货DNA Shuffling试剂盒批发,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京现货DNA Shuffling试剂盒批发,产品信息:
类别:核酸扩增(PCR)
英文名:DNA Shuffling Kit
产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
DNA Shuffling试剂盒 | BTN131178 | 10次 |
品牌:百奥莱博
规格:10次
英文名:DNA Shuffling Kit
编号:BTN131178
DNA Shuffling即DNA分子的体外同源重组,它是一种分子水平上的定向进化(directed evolution)技术,它以一个或多个基因为起始材料,通过先随机断裂成小片段,再进行互为模板和引物的PCR(无外加引物),最后再进行常规PCR(外加引物)等处理,最后得到含有大量DNA重组突变的PCR产物。其原理示意图如下:
产品特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品DNA模板,无需单独准备各成分。
2.操作手册经过优化,1-2天即可完成,节省大量优化时间。
3.本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
PCR Mix 3.0,2× | 1.5mL |
DNase I溶液(1U/μL) | 10μl |
溶液A,10× | 60μl |
溶液B,10× | 60μl |
超纯水 | 1mL |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
使用方法:
1.待突变基因片段的制备:待突变基因片段可以用含此基因的质粒为模板、用PCR法或酶切法制备。制备时需保证含此基因(或此基因的一部分)的DNA片段总长度不要超过1kb,同时比DNA shuffling终产物(第二轮PCR产物)长200-400bp。每次DNA Shuffling实验至少需要2μg起始DNA片段(如果含几个基因片段,则彼此的比例为1:1),并且必须通过胶回收的方法回收,以便彻底去除残留的质粒模板、引物和非特异扩增产物等。最后需用分光光度法准确定量。
2.提前准备37℃和75℃水浴,同时新鲜配制0.1U/μL的DNase工作液放冰上待用(必须在用时才配制,方法是将1μl 本试剂盒提供的1U/μL的DNase I溶液和1μl溶液A和8μl超纯水混合)。此溶液需在24小时内使用。
3.在一个离心管中,按顺序加入下列成分:
成分 | 用量 |
待突变基因片段(第1步制备) | 2μg |
溶液A | 5μl |
溶液B | 5μL |
DNase I工作液(第2步制备) | 2μL |
超纯水 | 36μL |
4.充分轻柔吹打混匀后37℃水浴8分钟,然后立即放75℃水浴处理10分钟以灭活DNase I。
5.在2-3%琼脂糖凝胶上电泳,用常规的胶回收法回收25-150bp范围的所有片段待用。注意:一定要加合适的DNA marker以便确定片段范围,最好使用本公司生产的绿如蓝核酸染料(可见光型)作为电泳染料以避免用UV照射DNA,否则UV使DNA发生的交联将极大降低后续扩增效果。
6.分光光度法精确测定回收片段的浓度。
7.在PCR管中按顺序加入0.5μg上步回收得到的回收片段、50μl 2×PCR Mix、加超纯水到100μl。
8.按下面的PCR反应参数进行第一轮无引物PCR:
过程 | 温度 | 时间 |
PCR前变性 | 94℃ | 150s |
PCR反应(40循环) | 94℃ | 30s |
47.5℃ | 45s | |
72℃ | 10s,每次循环后增加5s | |
PCR后延伸 | 72℃ | 10min |
9.取5-10μl进行电泳检测,然后进行PCR回收,得到第一轮PCR产物。
10.将回收的第一轮PCR产物1μl原液作为模板设置3管第二轮PCR反应。
成分 | 用量 |
回收的第一轮PCR产物 | 1μL |
PCR Mix 3.0,2× | 50μL |
自备DNA Shuffling引物 | 各1μM |
超纯水 | 加水到100μL |
11.按下列PCR参数进行第二轮PCR。
过程 | 温度 | 时间 |
活化 | 94℃ | 150s |
PCR反应(25次循环) | 94℃ | 30s |
47.5℃ | 45s | |
72℃ | 60s,每次循环后增加5s | |
PCR后延伸 | 72℃ | 10min |
12.电泳检测,回收预期大小的PCR产物,用于后续的构建克隆文库实验(略)。
疑难解答:
Q:易错PCR和DNA Shuffling有何区别?
A:前者引入的是点突变,后者引入的是重组突变。示意图如下:
北京现货DNA Shuffling试剂盒批发专业优质供应商:北京百奥莱博科技有限公司
关键词:BTN131178,DNA Shuffling Kit,DNA Shuffling试剂盒
我公司始终坚持“创新,品质,服务,节约,敬业,感恩”的理念。吸收新创意,严把质量关口,全方位的服务跟踪,坚持做出高品质产品。本着“追求、员工、技术、精神、利益”的宗旨。现拥有一批精干的管理人员和一支高素质的专业技术队伍。我们以质量为生命、时间为信誉、价格为竞争力的经营信念,立足于国内外市场。目前已在全国各大院系,和研究单位均有销*(代"售"),也得到了客户的认可。百奥莱博生产的DNA Shuffling试剂盒等试剂进入飞速发展期,为了更好的服务客户,公司长期储备海量库存,以此助推中国科技的快速发展,更好的造福人类!
更多有关北京现货DNA Shuffling试剂盒批发的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
编号 | 类别 | 名称 |
BTN130833 | 核酸扩增(PCR) | LAMP可见光染料 |
BTN71205 | DNA纯化 | 柱式土壤DNA提取试剂盒 |
BTN121122 | 探针标记及检测 | 柱式探针纯化试剂盒 |
BTN130806 | 克隆与表达 | 胚胎裂解液 |
BTN130592 | 蛋白质研究 | HRP标记内参抗体(β-actin) |
BTN70901 | DNA纯化 | 柱式真菌DNA提取试剂盒 |
BTN120653C | 探针标记及检测 | 填入法DNA末端标记试剂盒(地高*(代"辛")标记dUTP) |
BTN60807 | DNA纯化 | 柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒 |
BTN131289 | 其他细胞生物学试剂 | PLP固定液(Nakane-McLean固定液) |
BTN130863 | 细胞及免疫学 | 碘化丙啶(PI)干粉 |
BTN100210 | 探针标记及检测 | dNTP溶液(标记专用) |
BTN100307A | DNA纯化 | 酸洗玻璃珠(100μm) |
BTN80803 | DNA纯化 | 柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级) |
BTN130521 | RNA纯化 | 链霉亲和素磁珠 |
BTN90602F | 核酸电泳和回收 | DNA marker(λ/EcoRI+HindIII) |
BTN90801A | 克隆与表达 | 一站式TA克隆试剂盒 |
BTN130204 | 克隆与表达 | Oligo快速复性液 |
BTN130895 | 其他培养基 | YPD液体培养基(YPD酵母培养基) |
BTN60802A | DNA纯化 | 柱式细菌DNA提取试剂盒 |
BTN130918 | 核酸扩增(PCR) | dITP溶液(2.5mM) |
BTN130308 | 核酸扩增(PCR) | 一管式双链cDNA合成试剂盒 |
BTN140405 | DNA纯化 | 细菌内毒素标准品(10EU/支) |
BTN131042 | 核酸扩增(PCR) | miRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒 |
我公司强烈推荐核酸扩增(PCR)系列产品,热情期待您的咨询选购北京现货DNA Shuffling试剂盒批发。
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