酿酒酵母Y187感受态细胞 克隆与表达

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酿酒酵母Y187感受态细胞 克隆与表达由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多酿酒酵母Y187感受态细胞等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：酿酒酵母Y187感受态细胞 克隆与表达
规格：10×100μL
英文名：E.coli Y187 Rosetta Competent Cell
品牌：百奥莱博
 Y187菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母单杂，双杂实验用菌株，MATα型，可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株(Y2HGold，AH109等)通过mating 操作进行筛库试验。Transformation marker 为: trp1，leu2，报告基因为：lacZ，MEL1。Y187-GAL4 酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端1～ 174 位*基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒PGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C 端768～881 位*基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4 系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N 端1～174 位*基酸区段的DNA 结合域(DNA-BD)和位于C端768～881 位*基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD 单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD 不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD 融合，形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果 bait和prey发生相互作用，就会促使 BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。Y187 有两个报告基因：lacZ，MEL1，分别由两种不同的启动子(G1，M1)启动，这两种启动子只有GAL4 识别的17bp 核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。

 Y187感受态细胞是实验室常用酵母双杂用菌株，本产品经特殊工艺制作而成，经PGADT7质粒检测转化效率为104 cfu/μg DNA。

菌株基因型：MATα，ura3-52，his3-200，ade 2-101，trp 1-901，leu 2-3，112，gal4Δ，met–,gal80Δ，URA3: :GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ，MEL1

产品组成：

 

成分	规格
Y187感受态细胞	0.1ml×10支
PGADT7(control vector)，10 ng/μL	10μl
Carrier DNA，5μg/μL	100μl
PEG/LiAc	5ml
说明书	1份

储存条件：感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/liAC、PGADT7质粒4℃保存；有效期半年。

自备试剂：目的DNA、YPDA、SD培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中依次加入预冷的目的质粒2-5μg，CarrierDNA(95-100℃ 5分钟，快速冰浴，重复一次)10μL，PEG/LiAc 500μL，吹打混匀，30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6-8次混匀)。
3. 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6-8次混匀)。
4. 5000rpm离心 40秒，弃上清。取400μL ddH2O 重悬沉淀，5000rpm离心 30秒，弃上清。
5. 取 50μL ddH2O 重悬沉淀，涂板，29℃培养48-96小时。

注意事项：
1. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA 平板29℃，48h培养可见直径1mm 克隆；涂SD 单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 三缺或四缺平板29℃，80-90h培养可见直径1mm 克隆。
2.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。

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ARB11343 人美丽线虫凋亡基因(CED-3)ELISA代测服务 Human caenorhabditis elegans death gene,ced-3 ELISA KIT
ARB10296 人天门冬*酸*基转移酶(AST)elisa测定使用说明书 Human aspartate aminotransferase,ast ELISA KIT
BTN130899 GAL指示剂培养基 GAL Indicator Medium
皂化液   100ml
ARB12317 大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)尿液中含量检测 Rat hypoxia-inducible factor 1α,hif-1α ELISA KIT
L-甘-白二肽 Rhodamine 6G 869-19-2
9032-75-1 Pectinase  果胶酶(40u/mg)
L-核糖 CTC 24259-59-4
PY08-028  一次性血液增菌培养基 10ml  10支/盒，用于从血液中分离病原菌
*芴酮 TPPTS 975-17-7
L-天门冬*酸*盐 Egg yolk powder 3792-50-5
阿莫西林 Locust bean gum 61336-70-7
维生素C检测试剂盒(铜氧化微板法)   100T
ARB10437 人甲状腺抗体(TAb)elisa测定使用说明书 Human thyroid antibody,tab ELISA KIT
PY02-095  布氏肉汤  250克  
弹力纤维染色液(改良Gomori醛品红法)   4×50ml
9001-12-1 胶原酶Ⅴ CollagenaseⅤ
HC0218 移液器
琼脂糖蛋白A VA
1064-48-8 NAPHTHOL BLUE BLACK ELECTROPHORESIS  *基黑10B
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·RNase A溶液(2mg/mL)
编号：BTN60309
英文名称：RNase A Solution(2mg/mL)
规格：1.5mL
本产品是浓度为2mg/mL的RNase A溶液，不含DNase和蛋白酶活性，可以用于DNA提取(包括质粒DNA提取)时和蛋白质纯化时去除RNA污染。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·组织培养专用蛋白酶抑制剂
编号：BTN130531
英文名称：Protease Inhibitor for Tissue Culture
规格：1mL
本产品就是混合各种蛋白酶抑制剂而得的200×浓缩液，溶剂为DMSO。组织培养时，各种分泌蛋白会不同程度的被各种外源和内源性蛋白酶降解。为防止分泌蛋白的降解，需要在培养基中添加各种蛋白酶抑制剂。

产品特点：
1. 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
2. 抑制谱广，由多种蛋白酶抑制剂组成，能特异性抑制丝*酸蛋白酶、半胱*酸蛋白酶、天门冬*酸蛋白酶及*基肽酶等各种蛋白酶活性。
3. 它可以与各种组织培养基兼容，在培养基中加入1/200体积即可。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期两年。

·蛋白酶K溶液
编号：BTN80911
英文名称：Proteinase K Solution
规格：5mL
本产品是浓度为10mg/mL的蛋白酶K溶液，可以直接加入到各种溶液中降解其中的蛋白质。可以用于核酸纯化、原位杂交、DNA脉冲电泳和蛋白指纹图谱分析等实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


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·50mL亲和层析柱
编号：BTN140653
英文名称：Affinity Chromatography Colum(50mL)
规格：50mL
本产品适用范围广泛，可用于纯化分离重组蛋白、抗体和抗原、多肽、糖蛋白、磷酸化蛋白、DNA及DNA结合蛋白等生物大分子；还可以用于去除生物样品中的内毒素等污染。

亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而发明的纯化技术。它是利用生物分子间存在的特异性相互作用(如抗原－抗体、酶－底物或抑制剂、激素－受体等)，通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。

亲和层析柱常见的使用方法有重力法、手动加压法、蠕动泵法，其示意图如下：


储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

常用亲和标签及纯化方案：


·酿酒酵母EGY48化学感受态细胞
编号：BTN140387
英文名称：E.coli EGY48 Chemical Competent Cell
规格：10×100μL
 EGY48感受态细胞是实验室常用酵母双杂用菌株，MATα型，可转化质粒或mating 操作。Transformation marker为his3，trp1，ura3 ，报告基因为LEU2 。本产品经PGBKT7质粒检测转化效率为104cfu/μg DNA。

基因型：MAT α，ura3，his3，trp1，Lex Aop(x6)-LEU2

储存条件：干冰运输，-80℃保存，有效期6个月。

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