5´RACE试剂盒品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

5´RACE试剂盒品牌是高品质的基因结构和功能产品，由北京百奥莱博供应，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多5´RACE试剂盒等基因结构和功能产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：5´RACE试剂盒品牌
编号：BTN101105
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：10次
研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点，目前最通用的方法是5´-RACE法，RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术，它在不建立cDNA文库的前提下，利用已知cDNA序列设计引物，通过往两端延伸和扩增获得其5´-端序列。本试剂盒就是根据5´-RACE原理而开发。RACE的原理如下图：


产品特点：
1. 即开即用，客户不需要单独准备各种材料。
2.反应条件经过精心优化，包括使用无RNase H活性的MMLV和优化的引物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV逆转录酶-RI混合液(RNase H-，200U/μL)	10μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	60μl
微量核酸沉淀剂	400μl
TdT(末端转移酶)	10μl
2×TdT Buffer(含dATP)	100μl
PCR MagicMix 3.0	1.5ml
5´-RACE引物A-引物B混合液	100μl
5´-RACE引物C	100μl
RNase-Free水	1ml

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

1.变性模板RNA：将1μg mRNA或5μg总RNA加入到一个RNase-free的PCR管中，补RNase-Free水到9μL，65℃保温5分钟后短暂离心，立即放冰上待用。如果RNA浓度偏低，体积超过9μl,可以使用本公司的核酸浓缩剂(需另购,产品编号为BTN110801)浓缩到所需的体积。
2. 设置RT反应(用户可以根据需要设阴性对照)：在上步的含变性后的RNA模板的PCR管中，按顺序加入：

成分	用量
自备的基因专一性引物A(10μM)	4μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	6μl
MMLV逆转录酶-RI混合液	1μl
合计	20μl

3. 37℃保温60分钟，42℃保温30分钟，50℃保温10分钟，最后75℃保温10分钟使逆转录酶变性。
4. 短暂离心5秒后待用。
5.在PCR管中加入40μl微量核酸沉淀剂(本产品含不溶的核酸助沉剂，用前需要充分摇匀再取用)，震荡混匀。
6.室温12000rpm离心15分钟，小心吸弃上清。
7. 加入1mL自备75%乙醇，室温12000rpm离心5分钟，小心吸弃上清。
8. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体后，稍微晾干后加入10μL RNase-free水，充分吹打溶解，得到cDNA溶液。注意：为保证加尾效率，溶解cDNA的RNase-free水最好不要超过10μl。
9. 加尾反应：在10μL cDNA溶液中加10μL 2×TdT Buffer(含dATP)和1μL TdT酶，轻柔吹打混匀。
10. 37℃保温15分钟进行加尾反应，然后75℃保温3分钟灭活末端转移酶。
11. 加入0.5mL RNase-free水稀释加尾反应体系。此稀释液将作为PCR的模板。
12. 第一轮PCR：用不同量的稀释后的加尾反应液设置PCR反应(样品组最好设用量梯度，单位：μL)。

成分	梯度1	梯度2	梯度3	梯度4
PCR MagicMix 3.0	25	25	25	25
自备基因专一性引物B(10μM)	2.5	2.5	2.5	2.5
5´RACE引物 A-引物B混合液	2.5	2.5	2.5	2.5
稀释后的加尾反应液	1	5	10	15
RNase-free 水	19	15	10	5
合计	50	50	50	50

13. 按下列条件进行 PCR(注：应根据实际情况选择适当的退火温度)。
 第1次循环：94℃ 5分，48-52℃ 2分，72℃ 4分
 第2-30次循环：94℃ 40秒，52-60℃ 1分，72℃ 3分
 最后延伸：72℃ 15分
14. 取10-20μL PCR产物进行琼脂糖电泳电泳检查PCR结果，如果一条清晰的条带，则可以不做后续的第二轮PCR，而直接进行 DNA 测序或TA克隆。
15. 第二轮PCR：如果第一轮PCR没有一条清晰的条，则带从4管PCR产物中各取1μL分别加入到20μL RNase-free水中进行稀释，然后各取1μL分别作为4管第二轮PCR的模板：

成分	用量
第一轮 PCR产物的稀释液	1μl
PCR MagicMix 3.0	25μl
5´RACE引物 C	2.5μl
自备基因专一性引物 C(10μm)	2.5μl
RNase-free 水	补水至50μl
合计	50μl

16. 按下列条件进行 PCR：第 1-30次循环(94℃ 40秒，52-60℃ 1 分，72℃ 3分)，最后延伸：72℃ 15分
17. 取10-20μL第二轮 PCR产物进行琼脂糖电泳，一般都会有一个样品有清晰的条带出现，则可以直接进行DNA测序或TA克隆。

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·红细胞裂解液B型(流式细胞分析用)
编号：BTN90309
英文名称：Red Cell Lysis Solution,Type B
规格：250mL
本品用于快速裂解哺乳动物全血中的红细胞而基本不破坏白细胞和其他淋巴细胞的完整性和生物学活性。由于红细胞是血液的主要细胞成份，不含DNA和RNA，其所含血红素能抑制PCR反应，所以先用本产品裂解红细胞，再提取基因组DNA或RNA 有助于提高所得样品纯度。

产品特点：
1.可以处理人全血、小鼠全血、脾细胞中的红细胞。
2.高效，一次处理能裂解80%以上的哺乳动物红细胞，能回收90%左右的白细胞。一般样品最多只需要处理两次。
3.扩容性好，可以一次处理多达几十毫升的样品，也可以处理100μL的血液。
4.基于NH4Cl 裂解法，得到的白细胞主要用于流式细胞分析。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
用去离子水将本产品(10×)稀释为1×工作液(1mL 本产品加9mL去离子水)，待温度回到室温或37℃加热到37℃的时候再使用。工作液不能长期放置，只能现配现用。

一．裂解哺乳动物全血中的红细胞
1.离心哺乳动物抗凝血液后弃血浆部分，按每1mL 哺乳动物抗凝血液细胞沉淀加10mL 1×工作液的比例加入红细胞裂解液B型的1×工作液。
2. 轻柔吹打充分混匀。
3.室温放置 15分钟(注意：放置时间不要超过15分钟)。
4. 4℃1000rpm离心10分钟，吸弃红色的上清液。
5. 如果红细胞裂解不完全，可以重复第 1-4 步。
6. 用适当的自备缓冲液(如Hanks溶液)重悬白细胞沉淀。
7. 用于细胞计数和流式细胞分析等后续试验。

二．裂解组织细胞中的红细胞
1. 按标准方法用自备的胰酶将组织消化成单个细胞悬液，离心弃上清。
2. 按 1：10的比例向细胞沉淀中加入红细胞裂解液B型工作液，轻柔吹打均匀。
3.室温放置 15分钟(注意：放置时间不要超过15分钟)。
4. 4℃ 1000rpm离心10分钟，吸弃红色的上清液。
5. 如果红细胞裂解不完全，可以重复第 2-4 步。
6. 用适当的自备缓冲液(如 Hanks溶液)重悬白细胞沉淀。
7. 用于细胞计数和流式细胞分析等后续试验。


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·AMPPD
编号：BTN131143
规格：100mg
AMPPD的CAS号是122341-56-4。常用做碱性磷酸酶的化学发光底物，其发光的速度取决于碱磷酶的浓度。当碱磷酶偶合到杂交的探针时，便可以通过此系统检测到杂交分子的存在量。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。避免长时间暴露于光线下，请勿冷冻。

·橙黄G溶液(电泳级)
编号：BTN100948
英文名称：Orange G Solution,electrophoresis grade
规格：10mL
橙黄G分子式是C16H10N2Na2O7S2，分子量为452.36，CAS号为1936-15-8。 黄红色粉末或片状结晶，水溶液为橙黄色，溶于醇为橙色，不溶于酚和*仿，盐*(代"酸")对水溶液无变化，遇*氧化*呈黄红色，遇*氧化*生成结晶性*盐。有刺激性。本产是甲基橙的1%水溶液，用作制备电泳上样液和生物染色剂的母液。其泳动率在0.5-1.4%琼脂糖中相当于50bp dsDNA。

储存条件：常温运输及避光干燥保存，有效期一年。

·DNA促旋酶
编号：BTN130651
英文名称：DNA Gyrase(E.coli)
规格：100U
DNA促旋酶(E.coli)是一种II型拓扑异构酶，在ATP存在下向DNA中引入负超螺旋。促旋酶全酶是由两个gyrA亚基(97 kDa)和两个gyrB(90kDa)亚基组成的异源四聚体。本产品主要用于向DNA引入负超螺旋。其反应原理图如下：


储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位是指在30μl反应体系中，37℃条件下，30分钟内催化超过95%的0.5μg底物转变为超螺旋质粒所需的酶量。DNA超螺旋化通过不含*化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。

热灭火：65℃加热20分钟。

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