北京DNA甲基化修饰试剂盒厂商

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京DNA甲基化修饰试剂盒厂商，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京DNA甲基化修饰试剂盒厂商
英文名：Embedded Bisulfite Modification Kit
品牌：百奥莱博
规格：150次
亚硫*(代"酸")*盐修饰DNA时要求DNA必须在单链状态，反应还必须在低温进行，常规的修饰试剂盒由于是在液相进行，要在低温下让DNA不相互复性而保持单链状态非常棘手，所以常规修饰试剂盒的修饰效率一般都不高。此外，常规方法要切换反应液，有多次沉淀步骤，使得DNA的回收率一般都不超过50%。为克服这些缺点，本公司开发出了此升级产品。

产品特点：
1．用包埋的样品进行所有操作，免去所有沉淀和纯化步骤，极大简化了操作。
2．免去了DNA提取过程，所需实验材料比常规方法更少，最少几个细胞都可以，极大地节约了宝贵材料，尤其适用于珍稀材料。
3．包埋处理后，DNA在整个操作过程中都处于最适于修饰的单链状态，极大提高了修饰效率。
4．DNA包埋于包埋块中，切换反应液非常方便，而且DNA不会丢失，所以最终回收率都在90%以上。
5．适用于实体材料、悬浮细胞和纯化好的DNA样品。
6．本试剂盒足够制备150多个10μL包埋块(如果用纯化好的DNA)或25个10μL包埋块(如果用悬浮细胞)。

试剂盒组成：

 

成分	规格
包埋液	1.5ml
分子生物学级石蜡油	25ml
包埋块裂解液	12.5ml
蛋白酶K溶液(10mg/mL)	150μl
溶液A	30ml
溶液B成分一	2.3 g×5棕色瓶
溶液B成分二	110mg×5棕色管
TE缓冲液，pH8.0	125ml
说明书	1份

注: 包埋液用1.5mL旋盖离心管包装，溶液B成分一用5mL棕色瓶包装，溶液B成分二用1.5mL旋盖棕色管包装。

储存条件：低温运输、4℃保存、避免反复冻融，有效期一年。

使用方法：

一、准备试剂
1．在装有2.3g溶液B成分一干粉的瓶中加入3.9mL水和0.9mL溶液A，摇晃溶解得到4.8mL溶液B成分一。在装有110mg溶液B成分二干粉的离心管中加入1mL 50℃预热的超纯水，摇晃溶解，得到溶液B成分二。将0.6mL溶液B成分二加入到4.8mL溶液B成分一中，得到5.4mL溶液B，冰上放置待用。未用完的溶液B下次不得再使用。
2．每次实验前，将装有1.5mL包埋液离心管在沸水浴上放置数分钟直到变成溶液，然后放80℃待用。

二、对微量组织材料(如果材料足够，可先纯化DNA，再按第三方案进行)
1．用常规的胰酶消化法处理动物实体组织或培养细胞，得到浓度不超过60细胞/μL的单细胞PBS悬液。如果实验材料已经是单细胞悬浮液(如卵细胞)，则PBS洗涤后直接离心沉淀，再重悬在PBS中(浓度不超过60细胞/μL)。注：本试剂盒不含本步所需相关试剂。
2．在一个2mL离心管中加入3μL细胞悬液，再迅速滴加7μL在 80℃预热的包埋液。注：不需要吹打混匀以免混合液在抢头里面凝固。
3．加入500μL分子生物学级石蜡油，将离心管在沸冰浴中放置20分钟。
4．将离心管转移到冰上放置30分钟，低温下包埋液和细胞混合液将凝固成10μL的包埋块。
5．加入500μL包埋块裂解液和5μL Proteinase K溶液，37℃保温过夜。加入的溶液比重都比石蜡油大，将会自动沉降到石蜡油下层，不需离心。
6．吸弃包埋块之外的所有溶液(包括石蜡油)，用1mL TE缓冲液室温浸泡包埋块2次，每次15分钟。此步可去除残留包埋块裂解液。
7．酶切包埋块中的DNA：选定不识别PCR靶片段的内切酶(本试剂不提供该相关试剂)，再用100μL选定内切酶的1×缓冲室温液浸泡包埋块15分钟，吸弃缓冲液后再加入100μL选定内切酶的1×缓冲液和50U选定的内切酶，37℃保温2小时。
8．吸弃酶切反应液，再加入500μL新鲜配制的处理液A(配制方法：100μL溶液A+400μL超纯水)室温放置15分钟，重复此步一次。此时DNA将呈单链。
9．吸弃处理液A后，用1mL新鲜配制的处理液B(注：不是溶液B，配制方法：50μL溶液A+950μL超纯水)室温浸泡包埋块5分钟。
10．吸弃处理液B，加入750μL石蜡油，然后沸水浴20-30秒，使DNA单链彻底彼此分开。
11．奖离心管转移到冰上放置30分钟使包埋块重新凝固。
12．在离心管中加入1mL预冷的溶液B，溶液B将自动沉降到石蜡油下层。继续在冰上放置30分钟。此步用于修饰单链的DNA。
13．将离心管转移到50℃放置3.5小时。
14．吸弃溶液B，用1mL TE缓冲液常温洗涤包埋块2次，每次15分钟。
15．吸弃TE缓冲液，用500μL新鲜配制的处理液C(50μL溶液A+450μL超纯水)常温洗涤包埋块2次，每次15分钟。
16．吸弃处理液C，用1mL TE缓冲液常温洗涤包埋块3次，每次10分钟.
17．吸弃TE缓冲液，所得包埋块可以在4℃保存数月待用，也可以用超纯水洗涤两次(每次15分钟)后直接用做100μL体系甲基化PCR的模板。

三、对纯化好的DNA
18．选用不识别PCR靶片段的合适内切酶酶切纯化的基因组DNA(本试剂不提供所需试剂)，总体积不超过20μL，基因组DNA不超过700 ng。
19．酶切结束后，沸水浴5-10分钟灭活内切酶并变性DNA。
20．冰上放置并短暂离心数秒后，再加入4μL溶液A，50℃保温15分钟。
21．迅速加入50μL在80℃预热的包埋液，用手指快速弹击管底混匀溶液并继续放80℃待用。不要吹打混匀以避免包埋液在移液枪头中凝固。
22．在一个新的2mL离心管中，加入1mL预冷的溶液B，再加上750μL石蜡油，并将离心管放冰上预冷。
23．迅速取80℃保温的混合液10μL，用在空中滴加的方式加到上步准备的预冷的离心管中，滴加的混合液遇冷将迅速在石蜡油中形成包埋块并自动沉入管底，得到1个包埋块。注意：不要将枪头浸入到预冷的溶液中，否则包埋液将迅速在枪头内凝固。如果包埋块没有沉到管底，可以用枪头将其拨到石蜡层下面的液相中。
24．再重复上步操作6次(步骤23)，共可以得到7个包埋块(约含100ng DNA)。
25．将离心管(含7个包埋块)继续放冰上30分钟进行修饰。
26．后续操作同第13-17步。

北京DNA甲基化修饰试剂盒厂商正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·X-gal溶液
编号：BTN80910
英文名称：X-Gal Solution
规格：10mL
本产品为浓度为20mg/mL的无色液体。X-Gal是E.coli β-半乳糖苷酶的底物，水解后呈现蓝色。其原理如下：

由于许多常用的克隆质粒载体的多克隆位点都是通过定点诱变的方法被安置在lacZ基因中，所以如果在培养基中加入IPTG诱导剂和X-Gal，则就可以根据菌落的颜色判断菌落中质粒是否携带插入片段(克隆成功与否)。

储存条件：低温运输、-20℃避光保存、有效期一年。

·白细胞裂解液
编号：BTN130989
英文名称：White Cell Lysis Solution
规格：250mL
本品为即用型白细胞裂解溶液，可以用于裂解分离纯化好的血液白细胞，用于DNA提取、RNA提取等后续实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以DNA提取为例)
1. 取新鲜抗凝血5mL，在10mL或15mL的塑料离心管中用红细胞裂解液裂解红细胞(红细胞裂解液有几种配方，用户需要根据所选产品的使用手册进行操作，这里不列出每种的详细步骤)，也可以直接2500rpm离心5分钟后取白细胞层到一新的10mL或15mL的塑料离心管中。
2.在所得的白细胞沉淀中或所得白细胞层溶液中加自备的生理盐水使得白细胞的终体积为2mL。
3. 加1mL的本产品，混匀后55℃ 保温3小时，其间轻轻振摇数次。
4. 加入3mL自备的Tris饱和酚，轻轻震摇5分钟，使得水相和酚相充分分开。
5. 3500rpm离心15分钟，上层水相含DNA，中间白色层为蛋白质，下层为酚相。
6. 将非常粘稠的含DNA的上清液转移到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。
7. 再用Tris饱和酚重复上面的抽提步骤，直到离心后中间层没有白色的蛋白出现为止。
8.在上清液中加入等体积的自备的*仿，轻轻震摇5分钟，3500rpm离心5分钟，转移上清液到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。此步可以除去残留的酚。
9.在上清液中加入0.1倍体积的自备的3 M 乙酸*溶液(pH5.2)和2倍体积的无水乙醇，轻柔颠倒混匀，将出现絮状的DNA沉淀。
10. 用移液枪头将DNA沉淀挑取出来，转移到1.5mL的塑料离心管中，用75%的乙醇浸泡2次。此操作可以去除DNA中残留的盐离子。
11.转移DNA沉淀到一个1.5mL的塑料离心管中，空气中放置10分钟左右待乙醇挥发后，加入0.5mL自备的TE缓冲液溶解DNA，4℃放置待用。


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·即用型BGG蛋白标准品系列
编号：BTN131220
英文名称：Instant BGG Standard
规格：7×1mL
本产品为预稀释型BGG蛋白标准品。性质稳定，过滤除菌，是配合BCA试剂和Bradford 试剂测定蛋白浓度时的理想选择。

产品特点：
1．七个数据点，浓度范围为125-2000微克/毫升；
2．本产品可用于快速制备标准曲线或者微孔板曲线；
3．使用方便，无需自己准备梯度稀释液；
4．产品稳定，消除时间差异和操作差异。

产品组成：

成分	规格
BGG溶液，125μg/ml	1ml
BGG溶液，250μg/ml	1ml
BGG溶液，500μg/ml	1ml
BGG溶液，750μg/ml	1ml
BGG溶液，1000μg/ml	1ml
BGG溶液，1500μg/ml	1ml
BGG溶液，2000μg/ml	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期2年。

使用举例：(BCA法微孔板测定蛋白质浓度)
1．取各个稀释浓度的BGG蛋白标准品和待测蛋白质样品各25μl，加入到微孔板中。注：如果样品有限，则可取标准品和待测未知样品10μl
2．在每一个孔中加入200μlBCA 测定工作液(本世纪盒不提供)，并在震荡器上震荡30秒，使其充分混合
3．将微孔密封，在37℃孵育30分钟
4．将微孔板冷却到室温。使用微孔板读数仪，测量样品在562nm或该波长附近的吸光值
5．将各个标准品和待测蛋白质样品在562nm处的吸光值减去空白标准品在562nm处的平均吸光值
6．将BGG 标准品在562nm处经过空白校正的平均吸光值对其浓度(μg/mL)作图，绘制标准曲线。
 注：如果使用与微孔板读数仪相关联的曲线拟合算法，四参数(二次方程)或最佳曲线拟合将会比简单的线性拟合提供更加准确的结果。如果手工对这些结果作图，对于标准曲线上的各个点，采取点对点描画曲线的方法，比直接进行线性拟合的结果更好

注意：若采用Bradford法、BCA试管法等其他方法测定蛋白浓度，实验步骤略有差异，详细操作方法请参考蛋白质浓度测定实验工具书。


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ARB11071 人轮状病毒抗原(RV Ag)ELISA检测服务 Human rotavirus antigen,rv ag ELISA KIT
PY08-001  营养琼脂平板 9CM  10皿/盒，用于细菌总数测定，该培养基不含糖，也可用于菌种的保存、传代及纯培养。
肠激酶 sodiu*(代"m") Sarcosine 9014-74-8
2-羟基*乙*(代"酸") L-Phenylalaninol 614-75-5
PY01-081A  水解乳蛋白  250克  
C1201 小鼠血清(无菌过滤)
BL1383 SABC小鼠IgG-POD kit
K-卡拉胶 4-Hydroxycoumarin 11114-20-8
F050319 豚鼠IgG抗体 Guinea Pig IgG
BL0951 胶体金标记羊抗人IgA(u链特异)抗体
二抗稀释液(Western) Second antibody diluent(Western)  100ml
A8015-18 小鼠血清Mice Serum
梭菌蛋白酶 Spermine tetrahydrochloride 9028-00-6
SJ0822 特美汀
*基黑10B染色液   100ml
ARB11083 人肾小球组织糖基化终末产物(GTE-AGE)elisa检测操作说明书 Human glomerular tissue extract-advanced glycosylation end products,gte-age ELISA KIT
脂质体2000 β-DPNH
PY02-235  T1N0肉汤  250克  

我公司强烈推荐基因结构和功能系列产品，热情期待您的咨询选购北京DNA甲基化修饰试剂盒厂商。