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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
656
- 英文名:
Cartilage RNA Extraction Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温运输,4℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应软骨RNA提取试剂盒怎么卖,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:软骨RNA提取试剂盒怎么卖
英文名:Cartilage RNA Extraction Kit
品牌:百奥莱博
规格:50次
产地:国产|进口
本试剂盒专门从各种软骨组织样品中快速提取总RNA的试剂盒,它能有效克服传统TRIzol方法提取软骨组织RNA时,十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。
试剂盒特点:
1. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染,OD260/280一般均在1.9以上。
2. RNA产率一般为5-15μg/100mg。
3. 操作简单,整个提取过程一般只需要10多分钟。
4. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern杂交、mRNA纯化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液B | 15ml |
| 溶液C | 25ml |
| 溶液D | 25ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 先将50-200mg新鲜或冷冻的软骨组织液氮研磨成粉,加入1mL溶液A(使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解)溶解,然后将研磨物转移到新的1.5mL离心管中,振荡混合30秒。也可以将软骨组织剪碎后与溶液A一起匀浆,再转移到离心管中。
2.在装有研磨物/匀浆物的离心管中加入0.3mL的溶液B,振荡器振荡30秒混匀。注意:振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3. 加入0.2mL自备*仿,振荡器振荡30秒混匀。注意:振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000~15000g离心2-5分钟。
5. 将上清液(约0.8mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
6.在上清液中加入0.5mL的溶液C,振荡器振荡30秒混匀。注意:振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
7. 加入0.2mL的自备*仿,振荡器振荡30秒混匀。注意:振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
8.室温12000~15000g离心3分钟,两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
9. 将上清液(约1mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
10.在上清液中加入0.5倍体积的溶液D,振荡器振荡30秒混匀,此时溶液呈白色浑浊状。注意:振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
11.室温12000~15000g离心5-10分钟,RNA将在管底形成白色沉淀(约黄豆大小)。如果组织样品量少或需要提高RNA回收率,也可以延长离心时间到20-30分钟。
12.在离心管中加入1mL 75%的乙醇,振荡器上振荡混匀30秒。
13.室温12000~15000g离心5分钟,RNA将在管底形成细小沉淀(约芝麻大小)。
14. 重复上步75%的乙醇洗涤一次,RNA将在管底形成细小沉淀。
15.小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
16. 再短暂快速离心,用移液枪小心吸弃残留液。注意:不要吸弃沉淀。此步将有效去除残留的乙醇,否则后续反应会受到影响。
17. 加入适量(一般为20-50μl)RNase-free水使RNA沉淀溶解,存放于-80℃或立即使用。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则RNA将变得十分难溶。
18. 检测
a)RNA完整性的电泳检测
如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。如果是简单检测,可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA两用快速电泳液,但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques,9:558,1990)。普通DNA上样液不含变性剂,也没经过去RNase处理,所以最好不要使用。
尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳,因为TBE所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分,硼*(代"酸")通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应,形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物,使同样长度的RNA具有不同的泳动速度,电泳条带弥散,同时有大的RNA络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关,而RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反应,使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂,所以TBE对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行,最好是避免使用。
由于动物细胞中70-80%的RNA为rRNA,后者又由28S(约4800nt),18S(约1900nt)和5.8S(约120nt)三种组成,所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关,双链部分结合能力比单链部分强),所以28S rRNA条带的荧光强度一般比18S rRNA条带的荧光强度强1.5-2.3倍。如果这两条rRNA带不清晰或比例小于此范围则表示RNA有降解(因为大的RNA被酶降解的可能更大)。
b)RNA产量产率测定
将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280,否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%。
c)RNA纯度测定
无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),OD260/OD230一般在2.0-2.3之间,如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染,但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除,DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNA Scavenger和PS Scavenger去除。
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编号:BTN90308
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规格:25mL
本产品为一定浓度的Silane A174,其全名是3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷,CAS号是2530-85-0,分子量是280.35。主要用于制备PAGE胶时,处理其中一块玻璃板,使附着的凝胶不易被剥离。本产品最好跟剥离硅烷结合使用。但本产品不能用于硅化玻璃器皿。
储存条件:常温运输及保存,有效期两年。
·亲和素
编号:BTN131085
英文名称:Avidin
规格:10mg
本产品为母鸡卵清糖蛋白冻干粉末,亲和纯化,脱盐处理。它结合能力为11-15μg生物素/mg亲和素,等电点10~10.5,在很宽的pH和温度范围稳定。
产品应用:
➤作为与生物素化的酶结合或用于标记酶的免疫分析试剂。
➤作为富含生物素组织切片的封闭蛋白(使用0.1%来抑制内源生物素)。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
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规格:10U
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产品组成:
| 组份 | 规格 |
| 无机焦磷酸酶(100U/mL) | 100μL |
| 10×Buffer | 1mL |
| 使用手册 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:1单位指标准反应条件下,[0.5ml反应体系中,100mM Tricine(pH7.2),2mM MgCl2和2mM PPi,于25℃反应10分钟]每分钟催化从无机焦磷酸盐生成1μmol磷酸盐的酶量。
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