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- 百奥莱博
- YT222-ZFA
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
495
- 英文名：
CREB Mutation Probe For EMSA(10μM)
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
CREB consensus oligo的序列如下：
5"-AGA GAT TGC CTG ACG TCA GAG AGC TAG-3"
3"-TCT CTA ACG GAC TGC AGT CTC TCG ATC-5"
EMSA突变探针－CREB中CREB的公认的结合位点发生了突变，从而使CREB无法和该突变探针结合。在探针冷竞争反应中，正常的标记探针和CREB的结合的条带会被抑制；而在突变探针冷竞争反应(cold competition)中，正常的标记探针和CREB的结合的条带不会被抑制。参考下图。
一个典型的EMSA/Gel- Shift分析图
1,阴性对照反应(标记探针)；
2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；
3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记探针)；
4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记突变探针)；
5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋目的转录因子的特异抗体)。
注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。
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文献和实验, 5mMDTT加入到结合缓冲液中。如用纯化的蛋白，则用1-2ug的蛋白来检测迁移复合物。 2．AP2：AP2是一个转录调节因子，可分别作为TPA-和cAMP诱导因子（10）。它是一个52 kDa的蛋白，识别的同源序列为5`-CCCCAGGC-3`或5`-GC***GGC-3`（3）。这个因子对视黄酸特别敏感，可能在形态发生中起着重要作用。HeLa细胞核抽提物和AP2同源DNA探针形成一个特定的复合物。用纯化的蛋白作凝胶迁移实验时，应用20-50ng的蛋白。 3．CREB：CREB是一个37
寡核苷酸探针末端标记所需的试剂。Core 系统包括含重组AP2蛋白(AP2抽提液)的大肠杆菌抽提液和AP2的同源寡核苷酸。AP2抽提液是从表达AP2蛋白的大肠杆菌中提取的。另外，Core系统还含SP1同源寡核苷酸，凝胶迁移结合缓冲液，和能作20次对照实验的HeLa核抽提液。Complete系统含另外5个双链寡核苷酸，分别是AP1、OCT1、CREB、nf-kb 、 TFIID结合位点的同源序列。这些寡核苷酸可以在末端标记后用作特异性探针，或在竞争实验中用作非特异性探针。 4. 成功进行凝胶迁移
Shift Assay ) 凝胶迁移实验是一种研究DNA与蛋白质或RNA与蛋白质相互作用的常用技术。这项技术是基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合体在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中有不同迁移率的原理。当核转录因子与一条人工合成的特异的DNA或RNA结合后，其在PAGE中的迁移率将小于未结合核蛋白转录因子的DNA，从而检测到活化的与DNA或RNA结合的蛋白转录或调节因子。 发展: 从发展史来看,这项实验技术起初是用32P同位素标记人工合成的寡核苷酸形成探针,但是由于同位素的放射
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