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Methyltri-n-butylphosphonium Dimethylphosphate
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文献和实验甲基化时,解链温度高(如B);当等位基因的甲基化的发生集中于一条链或等位基因甲基化嵌合分布时,解链温度改变(如C、D) (图6参考引文 [37])。 图7:甲基化程度与解链温度关系示意图。p15Ink4b基因的荧光解链曲线,重亚硫酸盐处理HL-60(曲线a, 完全未甲基化的)和MOLT-4(曲线b, 完全甲基化的)这两个细胞系及取自慢性髓性白血病病人骨髓细胞中p15Ink4b的基因(其曲线为c和d,示部分甲基化的)。曲线a、b、c、d的解链峰值分别为81.3℃、88.9℃、84.4℃和86.2℃
]。 MSO要求预先设计一对含有2个不相邻的GC(或AC)的探针,用于识别甲基化和非甲基化的序列,其中含GC的探针(5[42]'---GC---GC---3')识别甲基化序列,含AC的探针(5'---AC---AC---3')识别非甲基化序列,探针的5'端通过Linker固定于玻璃板上。首先对待研究片段用重亚硫酸盐处理,将非甲基化的胞嘧啶变为尿嘧啶,甲基化的不变,再行PCR扩增,产物的3'端用荧光素标记,移至连有探针的玻璃板上进行杂交,通过检测杂交后产生的荧光强度判断待测序列中甲基化的水平。此方法一定
温度低(如A);完全甲基化时,解链温度高(如B);当等位基因的甲基化的发生集中于一条链或等位基因甲基化嵌合分布时,解链温度改变(如C、D) (图6参考引文 [37])。 图7:甲基化程度与解链温度关系示意图。p15Ink4b基因的荧光解链曲线,重亚硫酸盐处理HL-60(曲线a, 完全未甲基化的)和MOLT-4(曲线b, 完全甲基化的)这两个细胞系及取自慢性髓性白血病病人骨髓细胞中p15Ink4b的基因(其曲线为c和d,示部分甲基化的)。曲线a、b、c、d的解链峰值分别为81.3℃、88.9℃、84.4℃
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