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文献和实验免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 注意:在准备做磷酸(酯)酶实验的时候,不加磷酸酯酶抑制剂。 一、工作液配制 配制 100 ml 的 modified RIPA buffe: 1.称取 790 mg 的 Tris-Base,加到 75 ml 去离子水中,加入 900 mg 的 NaCl,搅拌
相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 1 、载玻片的处理: 抗原 修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响,极易造成脱片。为保证试验的正常进行,可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂,对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下: 1.1 APES:现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中,停留20~30
积的缓冲液平衡,切勿长时间的将柱子保存在NaOH溶液中。 如果常规清洗仍无法达到理想的效果,可以根据残留物的不同选择其它的清洗方式:例如:0.5M 醋酸溶液,1M NaOH,8M尿素或者6M 盐酸胍(针对蛋白沉淀),30%异丙醇(对于脂类或者疏水物质),再者还可以考虑使用胃蛋白酶(1mg/ml溶于0.1M醋酸、0.5MNaCl中)消化,再使用NaOH清洗。 5. 保存:如果超过2天不使用层析柱,建议使用2倍柱体积的水冲洗柱子后再使用2倍柱体积的20%乙醇冲洗柱子保存。(Hiload Superdex
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