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- 2025年07月13日
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免疫细胞化学染色方法
1、细胞标本置于载玻片上；
2、固定：建议使用95%乙醇或10%中性缓冲福尔马林固定液固定10分钟；
3、稍水洗，载玻片上加1%Triton X-100试剂，室温下孵育10分钟，PBS冲洗3x3分钟；
4、根据第一抗体的要求，对细胞进行相应的抗原修复；
5、如有必要，每张载玻片上加过氧化物酶阻断试剂，室温下孵育10分钟，PBS冲洗3x3分钟；
6、除去PBS，载玻片上加第一抗体，室温下孵育60分钟或4℃过夜，PBS冲洗3x3分钟；
7、除去PBS，载玻片上加检测试剂盒（按照试剂盒说明书进行操作），PBS冲洗3x3分钟；
8、除去PBS，根据检测试剂盒选择相应的显色系统，后中性树胶封固。
备注：更好的方法是通过离心或直接收集将细胞聚拢，再用蛋清或琼脂包裹后形成细胞块进行固定、脱水、包埋、切片，再按照免疫组化染色步骤进行操作。
免疫组织化学技术是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色。借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的一门新兴组化技术。
在病理学研究中，免疫组化技术的作用和意义颇为重要。免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到普遍认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50-75%。
组织的固定：病理学研究和免疫组化实验中，组织的固定是非常重要的一步。将目的组织放于某些化学试剂中，使组织中的细胞物质接近于具有生命功能时的结构和形态称为固定。组织固定还要减少外源性和内源性分解酶的作用，防止细胞自溶等，从而保持组织和细胞内的抗原性，使抗原不失活。
胞浆-5',3'-核苷酸酶,NT5C,免疫组化试剂盒人具有以下特点：多聚物技术，使得酶分子与二抗IgG分子直接结合形成的多聚物分子高度的敏感性、染色强度，可以避免由于生物素引起的非特异性背景显色，更适合于生物素含量较高的组织细胞的免疫组化实验；孵育时间短，只需孵育15分钟，使得免疫组化实验时间大为缩短，是医院病理科开展免疫组化实验的理想试剂盒。
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文献和实验/1.5kg ＝3.27 X mg/kg. 猫的剂量＝X mg/kg×70kg×0.078/2.0kg＝2.73 X mg/kg. 猴的剂量＝X mg/kg×70kg×0.06/4.0kg＝1.05 X mg/kg. 狗的剂量＝X mg/kg×70kg×0.32/12kg ＝1.87 X mg/kg. 整理为表格后如下： 附表2：不同实验动物与人的等效剂量比值（注：剂量按mg/kg算） 这个表看上去是以体重的比来计算剂量，但实际上仍是以体表面积换算。只不过是假定小鼠标准体重为20g、大鼠
浅析染色质免疫沉淀（ChIP）技术在 DNA 与蛋白质相互作用研究中的重要性
-19]； xChIP：用来研究DNA及低结合力蛋白，采用甲醛或紫外线进行 DNA 和蛋白交联，超声波片段化染色质，然后进行片段富集及后续分析，适用于多数非组蛋白的蛋白，例如 [9, 15, 20]。 X-ChIP 试验的一般过程 以上两种方法在分离 DNA-蛋白质复合物之后，对 DNA 进行 PCR 扩增，验证目标序列的存在。除验证实验外，ChIP DNA也可以进行测序分析，这种方法被称为 ChIP-seq [22] ；也可做芯片分析，这种方法被称为 ChIP on CHIP 或 ChIP
: 500 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 mM MgCl2 in sterile double distilled water. 5 ml 1 M Tris-HCl, pH 8.0 1.5 ml 1 M MgCl2 sddH2O to 10 ml 50:2:10 TTE: 50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2% Triton X-100, and 10 mM EDTA in double distilled water
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