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- 2025年07月14日
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免疫细胞化学染色方法
1、细胞标本置于载玻片上；
2、固定：建议使用95%乙醇或10%中性缓冲福尔马林固定液固定10分钟；
3、稍水洗，载玻片上加1%Triton X-100试剂，室温下孵育10分钟，PBS冲洗3x3分钟；
4、根据第一抗体的要求，对细胞进行相应的抗原修复；
5、如有必要，每张载玻片上加过氧化物酶阻断试剂，室温下孵育10分钟，PBS冲洗3x3分钟；
6、除去PBS，载玻片上加第一抗体，室温下孵育60分钟或4℃过夜，PBS冲洗3x3分钟；
7、除去PBS，载玻片上加检测试剂盒（按照试剂盒说明书进行操作），PBS冲洗3x3分钟；
8、除去PBS，根据检测试剂盒选择相应的显色系统，后中性树胶封固。
备注：更好的方法是通过离心或直接收集将细胞聚拢，再用蛋清或琼脂包裹后形成细胞块进行固定、脱水、包埋、切片，再按照免疫组化染色步骤进行操作。
免疫组织化学技术是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色。借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的一门新兴组化技术。
在病理学研究中，免疫组化技术的作用和意义颇为重要。免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到普遍认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50-75%。
组织的固定：病理学研究和免疫组化实验中，组织的固定是非常重要的一步。将目的组织放于某些化学试剂中，使组织中的细胞物质接近于具有生命功能时的结构和形态称为固定。组织固定还要减少外源性和内源性分解酶的作用，防止细胞自溶等，从而保持组织和细胞内的抗原性，使抗原不失活。
CREB结合蛋白,CREBBP,免疫组化试剂盒大鼠具有以下特点：多聚物技术，使得酶分子与二抗IgG分子直接结合形成的多聚物分子高度的敏感性、染色强度，可以避免由于生物素引起的非特异性背景显色，更适合于生物素含量较高的组织细胞的免疫组化实验；孵育时间短，只需孵育15分钟，使得免疫组化实验时间大为缩短，是医院病理科开展免疫组化实验的理想试剂盒。
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文献和实验。系统包括目的寡核苷酸，对照DNA结合蛋白，结合缓冲液，用于寡核苷酸探针末端标记所需的试剂。Core 系统（目录号E3050）包括含重组AP2蛋白（AP2抽提液）的大肠杆菌抽提液和AP2的同源寡核苷酸。AP2抽提液是从表达AP2蛋白的大肠杆菌中提取的。另外，Core系统还含SP1同源寡核苷酸，凝胶迁移结合缓冲液（5′），和能作20次对照实验的HeLa核抽提液。Complete系统（目录号E3300）含另外5个双链寡核苷酸，分别是AP1、OCT1、CREB,、NF-kB、 TFIID结合位点的同源
实验的 一种正对照。系统包括目的寡核苷酸，对照DNA结合蛋白，结合缓冲液，用于寡核苷酸探针末端标记所需的试剂。Core 系统（目录号E3050）包括含重组AP2蛋白（AP2抽提液）的大肠杆菌抽提液和AP2的同源寡核苷酸。AP2抽提液是从表达AP2蛋白的大肠杆菌中提取的。另外，Core系统还含SP1同源寡核苷酸，凝胶迁移结合缓冲液（5′），和能作20次对照实验的HeLa核抽提液。Complete系统（目录号E3300）含另外5个双链寡核苷酸，分别是AP1、OCT1、CREB,、NF-k B、 TFIID结合
锚定蛋白可使PKA定位于特定的亚细胞结构。 2. 环化核苷酸门控阳离子通道 嗅觉信号传递过程的离子通道以及心脏窦房结起搏细胞的离子通道有环核苷酸结合位点，能直接与cAMP结合并受其调控，称为环化核苷酸门控阳离子通道（cyclic nucleotide-gated cation channel，CNG）。 3. 鸟苷酸交换因子 鸟苷酸交换因子（guanine nucleo-tide exchange factors，GEF）也是cAMP结合蛋白，它们含cAMP结合位点，受cAMP调控
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